基于miR-17-5p/ATG7介导自噬探讨苍附导痰丸方对痰湿型多囊卵巢综合征的作用机制

作     者：于晓娜 

作者单位：山东中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：连方

授予年度：2022年

学科分类：1005[医学-中医学] 100509[医学-中医妇科学] 10[医学] 

主      题：多囊卵巢综合征 苍附导痰丸方 miR-17-5p ATG7 颗粒细胞自噬 

摘      要：目的自噬异常激活被认为是多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)发病的一个重要机制,本课题组早期研究发现自噬相关基因ATG7在痰湿型PCOS患者颗粒细胞(granulosa cells,GCs)中表达增加。本研究基于自噬探讨PCOS发病的机制,揭示自噬与PCOS临床表型的相关性。应用苍附导痰丸方干预,探讨中药治疗PCOS的疗效及可能的微观机制。方法第一部分:根据生物信息学软件预测结果,通过双荧光素酶实验验证自噬相关基因ATG7的相关联micro RNA。第二部分:选取符合痰湿型PCOS诊断标准的患者76例,按照随机数字表法分为实验组(苍附导痰丸方+IVF/ICSI)38例、观察组(安慰剂+IVF/ICSI)38例。另选取因男方因素行辅助生殖的患者38例为对照组(IVF/ICSI)。以期观测辅助中药治疗后临床症状的改善程度及检测指标的变化。三组患者皆采用拮抗剂方案进行控制性卵巢刺激,统计分析实验组和观察组患者治疗前后中医痰湿证候积分、体重指数(Body Mass Index,BMI)变化,比较三组患者促性腺激素(gonadotropin,Gn)使用天数、Gn用量、扳机日雌二醇(estradiol,E)、孕酮(progesterone,P)、促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)水平、获卵数、2PN受精率、优质胚胎率等临床指标,采用q PCR和Western Blot检测颗粒细胞中自噬相关基因ATG7及相关联micro RNA的表达水平。结果第一部分:miR-17-5p是ATG7相关联的micro RNA,miR-17-5p与靶基因ATG7的3’UTR能结合,并抑制其表达。第二部分:1.中医痰湿证候评分:实验组治疗后痰湿证候积分低于治疗前(P0.05),但实验组Gn用量有降低趋势。***日E、P、LH水平:三组患者HCG日E水平实验组高于观察组和对照组(P0.05)。5.获卵数:三组患者获卵数对照组低于实验组和观察组(P0.05),但实验组获卵数有升高趋势。6.2PN受精率、优质胚胎率:三组患者2PN受精率无明显差异(P0.05),但实验组较观察组有升高趋势;优质胚胎率实验组和对照组高于观察组(P0.05)。7.三组患者miR-17-5p、ATG7表达水平比较:miR-17-5p相对表达量实验组和观察组均明显低于对照组(P0.05),观察组低于实验组(P0.05);ATG7 m RNA相对表达量实验组和观察组高于对照组(P0.05),实验组和观察组无明显差异,但实验组的ATG7 m RNA相对表达量有降低趋势。ATG7蛋白表达水平观察组高于实验组和对照组(P0.05),实验组高于对照组(P0.05)。结论1.在PCOS患者中,低表达的miR-17-5p可能通过上调ATG7的表达使颗粒细胞过度自噬,从而参与PCOS的发生;2.苍附导痰丸方可显著改善痰湿型PCOS患者的临床症状,提高2PN受精率和优质胚胎率,可使miR-17-5p表达上调,ATG7表达下调;3.苍附导痰丸方对PCOS患者卵子及胚胎质量的提高可能与苍附导痰丸方通过上调miR-17-5p表达使ATG7表达受抑制,从而减弱PCOS患者颗粒细胞的过度自噬有关。