ROS与巨噬细胞NLRP3炎症小体活化的关系及IL-22调控作用研究

作     者：韩雪妹 

作者单位：海南医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：王日兴

授予年度：2022年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 

主      题：脓毒症 脂多糖 IL-22 活性氧 NF-κB NLRP3炎症小体 

摘      要：目的:探索ROS与巨噬细胞NLRP3炎症小体活化的关系及IL-22的调控作用及可能作用机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,运用CCK-8试验盒检测不同浓度LPS、IL-22干预巨噬细胞时的IC50。进行实验分组,包括对照组、LPS组、LPS+IL-22组、NAC+LPS组、NAC+LPS+IL-22组,各组细胞进行干预并培养3、6、24h,收集各组细胞及上清液,运用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中IL-18和IL-1β的分泌水平,细胞免疫荧光法检测细胞内活性氧ROS的水平,实时荧光定量PCR(q PCR)检测各组细胞NLRP3、caspase-1m RNA及各组干预6h后NF-κB m RNA的表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞中NLRP3、caspase-1、p-65、p-p65的蛋白表达,最后对所得数据进行分析并得出结论。结果:1、LPS作用于巨噬细胞后,在3h至24h内,ROS水平升高,NLRP3、caspase-1的表达水平升高,IL-18、IL-1β分泌水平均有不同程度的增加,相比对照组差异均有统计学意义(P0.05)。当加入ROS清除剂NAC预处理时,上述表达被抑制。2、LPS与IL-22共同刺激巨噬细胞后,在3h至24h内,NLRP3、caspase-1的表达水平,IL-18分泌水平均有不同程度的增加,ROS的水平明显升高,相比LPS组差异有统计学意义(P0.05),IL-1β的分泌水平较对照组无明显差异,当加入ROS清除剂NAC预处理时,上述表达被抑制。3、当LPS与IL-22共同作用于巨噬细胞时,与NF-κB信号通路激活相关的p65、p-p65蛋白表达水平较对照组及LPS组显著升高(P0.05),当加入NAC预处理后,LPS+IL-22组NF-κB m RNA相对表达量较LPS+IL-22组显著下调(P0.05)。结论:1、ROS与巨噬细胞NLRP3炎症小体的活化密切相关;2、IL-22可进一步促进LPS诱导的巨噬细胞NLRP3炎症小体的活化;3、IL-22通过ROS-NF-κB信号通路促进巨噬细胞NLRP3炎症小体活化。