蒲公英甾醇对肉鸡AFB1性肝损伤的干预作用及其机制研究

作     者：周鸿缘 

作者单位：延边大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张雪梅

授予年度：2022年

学科分类：090502[农学-动物营养与饲料科学] 0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

主      题：AFB1 肉鸡 肝损伤 蒲公英甾醇 氧化应激 

摘      要：黄曲霉素B1（Aflatoxin B1,AFB1）是饲料中黄曲霉毒素（Aflatoxin,AFs）存在的主要形式,也是危害最严重的一种毒素。饲喂AFB1污染的饲料会影响畜禽的生长性能,免疫力下降甚至丧失,引起肝脏的明显损伤,对畜禽产生极大的危害,给畜禽业养殖造成巨大的经济损失。蒲公英是一种多年生菊科中草药,富含矿物质、蛋白质、维生素等营养成分以及多糖、多酚、黄酮、萜类等活性物质。蒲公英甾醇作为蒲公英的主要活性成分之一,具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化等多种药理学作用。本实验室已研究表明蒲公英甾醇对药物性肝损伤、免疫性肝损伤以及酒精性肝损伤均具有明显的保护作用,但蒲公英甾醇是否可以控制或缓解AFB1所致的肝损伤尚不清楚。因此,本试验以蒲公英甾醇为研究对象,通过AFB1诱导肉鸡肝损伤模型,探讨蒲公英甾醇对肉鸡AFB1性肝损伤的干预作用及其机制。试验设立空白组,模型组,蒲公英甾醇低、中、高剂量组（25 mg/kg、50 mg/kg、100mg/kg）及阳性组（300 mg/kg水飞蓟宾）。空白组饲喂基础日粮,其余各组饲喂含有0.5 mg/kg AFB1的日粮,连续饲喂21 d,期间每日在饮水中给予对应浓度的药物。试验期结束后,统计各组肉鸡体重及料重比;通过试剂盒检测肉鸡血清中肝功能指标谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、γ-谷氨酰转移酶（GGT）、总胆红素（TBIL）、碱性磷酸酶（ALP）的含量;RT-qPCR法测定肉鸡肝脏CYP1A1和CYP2A6 mRNA表达量;通过眼观及病理切片对肉鸡肝脏组织进行病理学分析;通过试剂盒检测肉鸡肝脏组织氧化应激指标活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽（GSH）的活性;RT-qPCR法和Western Blot法分别测定肉鸡肝脏核因子E2相关因子2（Nrf2）、Kelch样ECH关联蛋白1（Keap1）、血红素氧合酶1（HO-1）、NAD（P）H:醌氧化还原酶1（NQO1）mRNA及蛋白表达量;透射电镜观察肉鸡肝细胞凋亡和自噬情况;RT-qPCR法测定肉鸡肝脏磷脂酰肌醇3-激酶K（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）以及B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bax、半胱天冬酶3（caspase3）mRNA表达量。结果显示,蒲公英甾醇提高了AFB1性肝损伤肉鸡的体重并降低料重比;蒲公英甾醇降低了AFB1性肝损伤肉鸡血清中肝功能指标AST、ALT、GGT、TBIL、ALP的活性及改善肝脏组织病理变化;蒲公英甾醇可下调肝损伤肉鸡肝脏中CYP1A1和CYP2A6 mRNA表达量;蒲公英甾醇抑制AFB1性肝损伤肉鸡肝脏中ROS和MDA活性,提高CAT、SOD、GSH活性;蒲公英甾醇可上调AFB1性肝损伤肉鸡肝脏中Nrf2、NQO1和HO-1 mRNA及蛋白表达水平,下调Keap1 mRNA及蛋白表达水平;蒲公英甾醇可抑制AFB1诱导的肝细胞凋亡现象,上调Bcl-2 mRNA表达,下调Bax、caspase3 mRNA表达;蒲公英甾醇可恢复AFB1诱导的肝细胞自噬现象,下调自噬因子PI3K、AKT、mTOR mRNA表达。综上所述,通过蒲公英甾醇干预可提高AFB1性肝损伤肉鸡的生长性能,改善肝功能指标、肝脏病理变化、氧化应激相关指标,抑制CYP2A6和CYP1A1mRNA在肝脏中表达,说明蒲公英甾醇对AFB1诱导的肉鸡肝损伤具有一定的保护作用。蒲公英甾醇对AFB1性肝损伤的干预机制主要是通过调控Nrf2/Keap1信号通路发挥其抗氧化作用,通过调控凋亡因子的表达提高肉鸡肝脏的抗凋亡能力,通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路从而有效恢复AFB1所致肉鸡肝脏细胞的自噬能力。这为蒲公英甾醇作为鸡AFB1性肝损伤防治药物的研发提供了理论依据,同时对长白山地区蒲公英野生资源的开发与利用具有一定的战略意义。