血小板microRNA-223调控内皮细胞ICAM-1表达在川崎病血管炎的作用机制研究

作     者：郭漫丽 

作者单位：广州医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：邓伟豪（Tang Wai Ho）

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100202[医学-儿科学] 10[医学] 

主      题：川崎病 血小板 内皮细胞 miR-223 ICAM-1 

摘      要：【背景】:川崎病(KD)是一种病因不明的急性全身性血管炎,可导致永久性冠状动脉损伤。内皮细胞(EC)功能障碍和血小板过度活跃等是KD的典型病理特征。其中活化的血小板被证实参与调控内皮细胞功能障碍。Micro RNA是一种短链非编码RNA,在血小板中表达丰富,可以通过直接结合3′非翻译区来调节靶基因m RNA表达,从而下调蛋白质水平。血小板微粒(PMPs)传递的miR-223在已被证实在脓毒血症中参与内皮细胞的功能调节。然而,血小板来源的miR-223在KD引起的内皮功能障碍中的作用仍未明确。【目的】:探究血小板来源的miR-223在KD血管炎引起的内皮功能障碍中的作用及分子机制。【方法】:1.随机收集45名KD患儿及45名匹配健康儿童的血样样本,分析血小板活化指标及血小板miR-223表达水平差异。2.采用免疫荧光及透射电镜观察KD血小板能否进入HCAECs。3.采用RT-q PCR检测与KD血小板共培养后HCAECs的miR-223水平变化。4.采用内皮-单核细胞粘附实验,探究血小板miR-223对HCAECs的单核细胞粘附功能调控。5.采用Western-blot及免疫荧光实验,探究血小板miR-223对细胞间细胞粘附分子-1(ICAM-1)的调控作用。6.采用血小板特异性miR-223敲除(PF4-cre:miR-223)的C57BL/6小鼠和miR-223 C57BL/6小鼠。腹腔注射乳酸菌细胞壁提取物(LCWE)构建KD小鼠模型。体内实验探究,血小板miR-223缺乏对血管炎症细胞浸润及血管内皮细胞ICAM-1的影响。【结果】:1.KD患儿较健康儿童相比,血小板活化指标显著升高并高表达miR-223。2.KD血小板可以进入HCAECs。3.KD血小板向HCAECs水平转移miR-223,转移的miR-223主要来自KD血小板,而不是血小板微粒(PMPs)或血小板释放物中的游离miRNAs。4.KD血小板来源的miR-223减弱了TNF-α诱导的HCAECs的单核细胞粘附。5.KD血小板来源的miR-223靶向ICAM-1。6.体内实验提示,血小板-miR-223缺乏加剧了腹主动脉的内膜增厚及炎症细胞浸润,同时内皮中ICAM-1的表达增加。【结论】:血小板来源的miR-223的水平转移抑制了HCAECs中ICAM-1的表达,在一定程度上减弱了白细胞的粘附,从而减少了KD血管炎的内皮损伤。