雄激素受体水平与主动脉夹层发生发展的相关性研究

作     者：何雨祯 

作者单位：中国医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张健

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

主      题：主动脉夹层 HIPPO信号通路 MST1 YAP 凋亡 

摘      要：目的:主动脉夹层（Aortic dissection,AD）是一种常见的血管外科急症,它是胸主动脉,主动脉弓及升主动脉的内膜破裂,血液涌入血管壁,中层平滑肌及外膜撕裂所形成血管真假腔为特点的血管节段性病变。疾病的发生伴随着血管壁的严重损伤与结构重整,具有潜在的死亡风险。性别与年龄是疾病发生发展的相关因素。我们的前期研究发现AD男性患者雄性激素水平往往更低,通过血清学分析得出雄性激素的降低会促进AD的发生发展。有研究发现雄激素受体（Androgen receptor,AR）调节HIPPO通路,AR可以结合YAP促使其核内转移从而促进相应蛋白的表达,维持细胞的增殖与代谢,减少其凋亡的发生。也有研究发现AR与MST1相互作用,雄激素通路与HIPPO信号通路存在调节关系。HIPPO通路在AD的发生过程中会被激活,间接导致血管壁细胞凋亡的增加。研究发现血管壁机械应力的增加会激活HIPPO信号通路,诱导YAP磷酸化。YAP在血管应力增加后明显降低表达,促使血管平滑肌细胞发生凋亡。鉴于此我们进一步探究阻断AR是否会通过调节HIPPO通路的异常激活加剧血管平滑肌细胞的凋亡及细胞外基质的重构进而导致夹层发生。研究方法:选取3周50g SD大鼠,随机进行分组HC,VEHICLE,Flutamide+BAPN,BAPN组,每组各20只大鼠。采用0.25%BAPN水溶液法进行AD模型建立。Flutamide腹腔注射进行AR阻断模型的建立,通过采用HE与EVG染色法进行夹层形态学与弹力纤维的评估,采用ELISA法检测血清脂代谢水平,蛋白印迹（Western-blot）与免疫组化（Immunohistochemical,IHC）及免疫荧光（Immunofluorescence,IF）法分别对AR阻断情况进行评估,检测MMP2与MMP9蛋白来评估细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）降解状况。同时对HIPPO信号通路关键蛋白MST1,YAP,p-YAP进行分析,在组织切片上染色定位。最后采用Tunel法检测凋亡的细胞以及Western-blot法检测Cleaved-caspase3凋亡蛋白表达情况。结果:雄激素受体阻断后动脉夹层的形成会加剧,表现为夹层破口增加及夹层发生率增加。结果显示Flutamide+BAPN组夹层形成率为75%,BAPN组夹层形成率为35%,其余组别未见夹层出现（p0.001）。WB检测发现Flutamide阻断后AR表达明显降低（p0.01）。HE与EVG染色形态学评估HC,VEHICLE,Flutamide+BAPN组和BAPN组血管形态及弹力蛋白断裂水平,Flutamide+BAPN组和BAPN组中出现AD且弹力纤维断裂降解,Flutamide+BAPN组AD破口加剧。MMP2与MMP9蛋白在Flutamide+BAPN组表达显著增加,BAPN组表达可见增加,其余组别表达水平低（P0.001,P0.01）。HIPPO信号通路相关蛋白表达量上升,MST1,p-YAP的表达含量在Flutamide+BAPN组大量表达,BAPN组部分表达,HC和VEHICLE未见明显表达（P0.01,P0.001）。YAP的表达水平与MST1在各组间表达趋势相反（P0.01）,YAP的磷酸化降解间接导致细胞凋亡发生。Tunel检测发现Flutamide+BAPN组平滑肌细胞大量凋亡,BAPN组的部分细胞发生凋亡,未在对照组发现细胞凋亡发生（P0.001）。结论:雄激素受体在动脉夹层形成中起保护作用。在动脉夹层的形成过程中,HIPPO通路会被异常激活且表达量与夹层撕裂破口程度呈正相关。AR与MST1结合会减弱HIPPO通路的异常激活,同时减弱下游凋亡信号的传递,阻止平滑肌细胞凋亡的发生,细胞外基质的重构,从而抑制夹层的发生。