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Neural stem cell-conditioned medium upregulated the PCMT1 expression and inhibited the phosphorylation of mst1 in SHSY5Y cells induced by Aβ_(25-35)

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BIOCELL 2022年第2期46卷 471-478页

作者： XINWEI WU GUOYONG JIA HONGNA YANG CONGCONG SUN YING LIU ZENGYAN DIAO Department of Geriatrics Qilu HospitalCheeloo College of MedicineShandong UniversityJinanChina Department of Neurology Qilu HospitalCheeloo College of MedicineShandong UniversityJinanChina Department of Critical-Care Medicine Qilu HospitalCheeloo College of MedicineShandong UniversityJinanChina

A progressive neurodegenerative disease,Alzheimer’s disease(AD).Studies suggest that highly expressed protein isoaspartate methyltransferase 1(PCMT1)in brain *** the current study,we explored the effects of neural stem cell-conditioned medium(NSC-CDM)on the PCMT1/mst1 pathway to alleviate Aβ_(25-35)-induced damage in SH-SY5Y *** data suggested that Aβ_(25-35) markedly inhibited cell ***-CDM or Neural stem cell-complete medium(NSC-CPM)had a suppression effect on toxicity when treatment with Aβ_(25-35),with a greater effect observed with NSC-CDM.Aβ_(25-35)+NSC-CDM group exhibited an increase in PCMT1 ***-PCMT1 markedly decreased cell proliferation and suppressed the protective role of NSC-CDM through the induction of apoptosis and improved p-mst1 *** of PCMT1 reversed the Aβ_(25-35)-induced decrease in cell proliferation and *** summary,our findings suggest that NSC-CDM corrects the Aβ_(25-35)-induced damage to cells by improving PCMT1 expressions,which in turn reduces phosphorylation of mst1.

关键词： Neural stem cell conditioned medium Protein isoaspartate methyltransferase 1 mst1 Amyloidβ_(25-35) Apoptosis

mst1的酵母双杂交及与Salvador体外结合的研究

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华东理工大学学报（自然科学版） 2006年第4期32卷 407-410页

作者：张乐帅赵健华东理工大学应用生物学系上海200237

利用酵母双杂交系统,以鼠M ST 1(M amm alian STE 20-1 ike 1)为诱饵蛋白,在鼠胚胎库中筛选到22个Salvador的片段。通过***表达系统纯化了6个组氨酸(6H is)融合的M ST 1和谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合的Salvador,并做体外蛋白质结合实验,... 详细信息

利用酵母双杂交系统,以鼠M ST 1(M amm alian STE 20-1 ike 1)为诱饵蛋白,在鼠胚胎库中筛选到22个Salvador的片段。通过***表达系统纯化了6个组氨酸(6H is)融合的M ST 1和谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合的Salvador,并做体外蛋白质结合实验,进一步证实了两蛋白质相互结合。通过体外激酶活性分析,发现M ST 1并不直接磷酸化Salvador,但是Salvador能够较强地抑制M ST 1对M BP(磷酸丁酯)的磷酸化,提示有可能Salvador通过影响M ST 1的激酶活性来参与了M ST 1介导的细胞凋亡途径。

关键词： mst1 Salvador 酵母双杂交磷酸化

mst1基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的影响

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肿瘤 2008年第10期28卷 852-854页

作者：罗学来李兆明严群李小兰陶德定龚建平胡俊波华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤研究所／胃肠外科武汉430030

目的:探讨mst1(mammalian sterile 20-like kinase 1)基因对人乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的影响。方法:构建含有标签蛋白FLAG的mst1质粒pCMV-FLAG-mst1;将构建好的pCMV-FLAG-mst1质粒在脂质体lipofectamine 2000的介导下转染MCF-7细胞,通过Western印迹法分析mst1在MCF-7中的表达情况;分别在转染后12、24、36和48h通过MTT法观察mst1对细胞增殖的影响;转染后36h加入5-溴-2’脱氧尿嘧啶(bromodeoxy uridine,BrdU),通过其掺入比率显示mst1对细胞增殖的影响;转染后36h加入顺铂,作用14h后通过AnnexinⅤ检测其对细胞凋亡的影响。结果:成功构建pCMV-FLAG-mst1质粒;MTT及BrdU检测显示,转染pCMV-FLAG-mst1质粒后MCF-7细胞增殖明显受到抑制;Annexin Ⅴ检测结果提示,高表达mst1后,细胞的凋亡率相对增高。结论:在乳腺癌细胞MCF-7中高表达mst1,不仅可以抑制细胞增殖,还可以促进细胞凋亡。

关键词：乳腺肿瘤细胞增殖细胞凋亡基因 mst1 细胞 MCF-7

小干扰RNA沉默mst1基因减轻TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

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中南大学学报（医学版） 2012年第7期37卷 669-674页

作者：阮溦李锁北徐军美肖锋谭嵘中南大学湘雅二医院麻醉科中南大学麻醉研究所长沙410011

目的：探讨丝／苏氨酸蛋白激酶（mammaliansterile20-likekinase1，mstl）对肿瘤坏死因子．a（tumornecrosisfactorqTNF-α）诱导的人脐静脉内皮细胞（humanumbilicalveinendothelialcell，HUVEC）凋亡的影响及作用机制。方法：用不同浓度的TNF-α（0-100ng／mE）诱导内皮细胞凋亡，24h后通过TUNEL法观察内皮细胞凋亡率，Western印迹分析TNF-α对mstl活性的影响；随后将构建的mstl小干扰RNA（smallinterferenceRNA，siRNA）在脂质体Lipofectamine2000的介导下转染原代HUVEC，转染后24h加入TNF-α（10ng／mL）诱导HUVEC凋亡，24h后通过Western印迹确定mstlsiRNA的基因沉默效率；通过TUNEL法观察mstl基因的敲除对TNF-α介导的内皮细胞凋亡的影响；并进一步用Western印迹观察mstl基因敲除对Caspase，3活性的影响。结果：TNF-α（10，40，100ng／mL）能导致内皮细胞凋亡显著增多（P〈0．001），并且呈剂量依赖性；随着TNF-α浓度增加，mstl的活化增多，mstl激酶活性相应增加；mstlsiRNA对内皮细胞中mstI基因表达的抑制呈剂量依赖性，100nmol／LmstlsiRNA能特异性沉默内皮细胞中mstl基因的表达（P〈0．05）；mstlsiRNA能明显减少TNF-α诱导的内皮细胞凋亡（P〈0．05），抑制TNF-α诱导的mstl裂解活化，同时caspase-3的活性也相应减少。结论：mstlsiRNA通过抑制caspase-3的级联放大效应减少TNF-α诱导的HUVEC凋亡。

关键词：肿瘤坏死因子-α 内皮细胞凋亡 mst1 caspase-3

mst1在同型半胱氨酸促肝细胞凋亡过程中的表达及意义

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世界华人消化杂志 2015年第16期23卷 2523-2531页

作者：孔繁琪马胜超赵丽和杨杨刘现梅周龙霞张辉张鸣号金少举姜怡邓宁夏医科大学基础医学院病理学与病理生理学系宁夏回族自治区银川市750004 四川大学基础医学与法医学院四川省成都市610065 宁夏医科大学检验学院临床检验诊断学教研室宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学药学院宁夏回族自治区银川市750004

目的:探讨mst1(mammalian sterile 20-like kinase 1)在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)促肝细胞凋亡中的作用.方法:动物水平:实验分为4组,每组12只小鼠.正常对照组:5周龄♂鼠(SPF级C57BL/6J)饲以普通饮食;Apo E-/-对照组:5周龄♂纯合子Apo E-/-鼠饲以普通饮食;Apo E-/-高蛋氨酸组:5周龄♂纯合子Apo E-/-鼠饲以高蛋氨酸饮食(普通饮食中加入1.7%蛋氨酸);Apo E-/-叶酸和维生素B12干预组:5周龄♂纯合子A p o E-/-鼠饲以高蛋氨酸饮食加0.006%叶酸和0.0004%维生素B12.喂养14 wk后,全自动生化分析仪测定血清Hcy水平;透射电镜、DAPI染色观察肝组织凋亡情况;实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)及Western blot分别检测mst1 m RNA和蛋白表达水平.细胞水平:分为3组:正常对照组(0μmol/L Hcy);高同型半胱氨酸(hyperhomocysteinemia,HHcy)组(100μmol/L Hcy);干预组(100μmol/L Hcy+叶酸+维生素B12);干预肝细胞48 *** VFITC/PI双标记流式细胞术检测肝细胞凋亡水平的变化;实时定量聚合酶链反应(q RTPCR)及Western blot分别检测mst1 m RNA和蛋白表达水平.结果:动物水平:(1)各组小鼠喂养20 wk后,测定血清Hcy水平,Apo E-/-高蛋氨酸组血清H c y水平分别是正常对照组和A p o E-/-对照组的2.3倍和1.9倍(P1).干预组血清Hcy水平较Apo E-/-高蛋氨酸组降低28%(P1),提示造HHcy模型成功;(2)电镜结果显示,A p o E-/-高蛋氨酸组小鼠肝细胞出现凋亡的倾向,染色质凝聚浓缩或边缘化,线粒体肿胀或浓缩、嵴断裂或变短,粗面内质网和滑面内质网明显肿胀、断裂、连贯性破坏、核糖体脱落,糖原溶解;(3)DAPI染色后观察,正常对照组和Apo E-/-对照组中细胞核大小均一、核圆,核膜光滑;Apo E-/-高蛋氨酸饮食组一些细胞出现核膜皱缩、细胞核呈现出各种不规则形状,提示可能存在凋亡;Apo E-/-干预组较Apo E-/-高蛋氨酸组细胞核损伤有所减轻;(4)与正常对照组和Apo E-/-对照组相比,Apo E-/-高蛋氨酸组肝组织mst1 m RNA及蛋白表达水平增高(P1),A p o E-/-干预组肝细胞mst1 m RNA及蛋白表达水平较A p o E-/-高蛋氨酸组有所降低(P1)与正常对照组相比,HHcy组肝细胞凋亡水平增高(P1),干预组较HHcy组有所减轻(Pmst1 m RNA及蛋白表达水平增高(P1),干预组肝细胞mst1 m RNA及蛋白表达水平较HHcy组有所降低(Pmst1表达上调,且叶酸和维生素B12可以抑制其表达上调.

关键词：同型半胱氨酸肝细胞凋亡 mst1 叶酸维生素B12

mst1对结直肠癌SW480细胞增殖与凋亡的影响

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南昌大学学报（理科版） 2015年第6期39卷 606-612页

作者：刘卓琦卢洪飞杨晓红万慧芳余乐涵许宝华张霞丽万福生南昌大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室江西南昌330006 南昌大学医学实验教学中心江西南昌330006 南昌大学实验动物科学中心江西南昌330006

mst1是死亡受体信号通路Hippo通路的核心成员,其基因表达异常多见于结直肠癌、肝癌、胃癌等肿瘤。为了探讨mst1表达对人结直肠癌SW480细胞增殖与凋亡的影响及其发生机制,采用PolyJet TM介导pEGFP-N1-mst1及LipofectamineTM2000介导mst1... 详细信息

mst1是死亡受体信号通路Hippo通路的核心成员,其基因表达异常多见于结直肠癌、肝癌、胃癌等肿瘤。为了探讨mst1表达对人结直肠癌SW480细胞增殖与凋亡的影响及其发生机制,采用PolyJet TM介导pEGFP-N1-mst1及LipofectamineTM2000介导mst1特异性-siRNA转染至SW480细胞,分别建立高低表达mst1的细胞模型。对不同分组的细胞增殖、凋亡及凋亡相关蛋白的表达进行检测。结果显示,mst1高表达组细胞增殖抑制、凋亡率及凋亡相关蛋白的表达显著增高,反之,mst1低表达组细胞增殖加快,细胞凋亡率及凋亡相关蛋白的表达显著降低。结果提示,mst1的靶向调控能较好地控制结直肠癌细胞的增殖与凋亡,可作为人结直肠癌防治的新研究靶点。

关键词： mst1 结直肠癌细胞增殖凋亡基因表达

mst1重组腺病毒的制备及对人子宫内膜间质细胞蜕膜化的作用

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生殖与避孕 2010年第4期30卷 217-222,268页

作者：赵静华美娟蒋玥甄鑫颜桂军孙海翔南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学生物技术重点实验室南京210046 南京大学医学院附属鼓楼医院生殖医学中心南京210008

目的:探讨丝/苏氨酸激酶mst1在人子宫内膜间质细胞蜕膜化过程中的作用。方法:制备Ad-FLAG-mst1重组腺病毒,用于感染人子宫内膜间质细胞;采用荧光定量PCR实验结合腺病毒介导的mst1基因过表达,分析人子宫内膜间质细胞蜕膜化进程中mst1的... 详细信息

目的:探讨丝/苏氨酸激酶mst1在人子宫内膜间质细胞蜕膜化过程中的作用。方法:制备Ad-FLAG-mst1重组腺病毒,用于感染人子宫内膜间质细胞;采用荧光定量PCR实验结合腺病毒介导的mst1基因过表达,分析人子宫内膜间质细胞蜕膜化进程中mst1的表达及其对蜕膜化特异性基因的调控。结果:获得滴度为2×1011ifu/ml的重组Ad-FLAG-mst1腺病毒,该腺病毒感染人子宫内膜间质细胞后,可高水平表达FLAG-mst1融合蛋白,过表达的mst1显著增加人子宫内膜间质细胞中PRL、IGFBP1、TIMP3和DCN等蜕膜化特异性基因的表达;体外培养的人子宫内膜间质细胞经8-Br-cAMP(0.5mmol/L)和MPA(1μmol/L)刺激后,细胞中mst1总蛋白水平增加3倍以上,同时磷酸化的mst1(Thr183)显著增加。结论:mst1的活化可能参与子宫内膜间质细胞的蜕膜化相关基因的调控。

关键词： mst1 人子宫内膜间质细胞蜕膜化

化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎大鼠Hippo/TAZ信号通路及相关蛋白TAZ、LATS2、mst1的影响

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中药药理与临床 2019年第3期35卷 105-110页

作者：王彦刚郝新宇于仁杰田雪娇河北省中医院石家庄050011 河北中医学院石家庄050200 中国石油大学北京102249

目的:研究化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎大鼠胃组织Hippo/TAZ信号通路及其相关蛋白转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)、肿瘤抑制激酶(LATS2)、哺乳动物不育系20样激酶(mst1)表达的影响。方法:采用联合造模法建立慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠模... 详细信息

目的:研究化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎大鼠胃组织Hippo/TAZ信号通路及其相关蛋白转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)、肿瘤抑制激酶(LATS2)、哺乳动物不育系20样激酶(mst1)表达的影响。方法:采用联合造模法建立慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠模型成功后随机分为模型组、维酶素0.06 g/kg组、化浊解毒方7、14、28 g/kg组,灌胃治疗12周。采用HE染色法观察胃黏膜组织病理改变,蛋白质印记法(Western Blot)、实时荧光定量PCR技术检测胃黏膜组织中TAZ、LATS2、mst1蛋白和mRNA的表达。结果:与正常组相比,模型组大鼠胃组织TAZ mRNA和蛋白表达水平显著升高,LATS2、mst1 mRNA和蛋白表达水平显著降低;与模型组相比,化浊解毒方组和维酶素组大鼠一般状态、胃黏膜组织病理变化均改善,胃黏膜组织TAZ蛋白和基因表达水平降低,LATS2、mst1蛋白和基因表达水平升高,并且治疗组中以化浊解毒方28 g/kg组作用最为显著。结论:化浊解毒方在CAG大鼠模型中可通过下调胃黏膜组织中TAZ蛋白和基因表达水平,上调LATS2、mst1蛋白和基因的表达水平而起作用,28 g/kg化浊解毒方能显著改善胃黏膜病理情况,在Hippo/TAZ信号通路的调节过程中,下调TAZ蛋白和基因,上调LATS2、mst1均优于维酶素组。

关键词：化浊解毒方慢性萎缩性胃炎 Hippo/TAZ信号通路 TAZ LATS2 mst1

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蛋白hSav1和mst1之间的相互作用

华中科技大学学报（医学版） 2008年第6期37卷 761-763,841页

作者：罗学来李兆明严群李小兰陶德定龚建平胡俊波华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤研究所/胃肠外科武汉430030

目的探讨hSav1(human salvador1)和mst1(Mammalian STE20-like 1)存在的相互作用,为进一步研究mst1的功能及相关机制奠定基础。方法以mst1cDNA全长构建诱饵蛋白载体pGBKT7-mst1,并对其自身转录活性进行鉴定,利用酵母双杂交系统筛选人胎... 详细信息

目的探讨hSav1(human salvador1)和mst1(Mammalian STE20-like 1)存在的相互作用,为进一步研究mst1的功能及相关机制奠定基础。方法以mst1cDNA全长构建诱饵蛋白载体pGBKT7-mst1,并对其自身转录活性进行鉴定,利用酵母双杂交系统筛选人胎肝文库,挑选单克隆,从而初步筛选出与mst1相互作用的蛋白。然后构建初步筛选出的蛋白hSav1的载体pCMV-HA-hSav1,与蛋白mst1的载体pcDNA/4TO-Flag-mst1共转染HEK293T细胞,利用相应抗体做二者的免疫共沉淀,以验证蛋白hSav1和mst1之间的相互作用。其次构建pEGFP-hSav1质粒转染HEK293T,利用免疫荧光观察二者在细胞内的定位。结果以mst1为诱饵蛋白在人胎肝文库筛选到包括hSav1在内的与之存在相互作用的蛋白。免疫共沉淀结果显示,hSav1蛋白可以在FLAG抗体的免疫沉淀物中检测出来,同样在hSav1抗体的免疫沉淀物中也能检测到蛋白mst1。免疫荧光的结果显示二者荧光在细胞内存在共定位,二者的荧光可充分融合。结论蛋白hSav1与mst1在哺乳细胞内存在某种相互作用,为进一步研究mst1的功能及相关机制提供了线索。

关键词： hSav1 mst1 蛋白相互作用