LncRNA EGOT通过调节PLS3表达促进胰腺癌的增殖和侵袭

作     者：段恒 

作者单位：大连医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：姚捷

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：胰腺癌 LncRNAEGOT 增殖 

摘      要：背景:胰腺癌是消化道常见恶性肿瘤之一,有“癌症之王的称号,胰腺癌患者早期的临床表现并不明显,无显著特异性,确诊时,多数患者已进入晚期。近年来,胰腺癌的发病率和死亡率明显增加,胰腺癌的发病率男性高于女性,目前主要的治疗方法仍是以外科手术为主,结合放化疗等综合治疗。但是,仅有约20%的早期发现早期诊断的患者可以接受手术治疗,并且预后不尽相同。据柳叶刀杂志记载,胰腺癌确诊后的五年生存率约10%。因此探索研究新的治疗靶点,研究胰腺癌发生发展的机制,对延长患者生命及提高患者生活质量有重要的意义。目前很多研究表明,长非编码RNAs(lnc RNAs)已被证明在不同的致癌背景下发挥核心作用。在各种肿瘤中差异表达,并且与肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移密切相关。通过生物样本库筛选出具有表达差异的RNA,并通过细胞实验及动物实验研究其分子生物学机制。方法:生物样本库筛选出有意义的RNA。并在5株PACA细胞系和1株正常胰腺细胞系中进一步验证结果。建立稳定敲降lnc RNA的PACA细胞系,通过qRT-PCR验证敲降效率,然过通过CCK-8、Ed U和伤口愈合试验检测肿瘤细胞的侵袭性和增殖情况。使用生物信息学方法预测lnc RNA的上下游靶基因,并通过荧光素酶实验验证他们之间的相互作用。结果:qRT-PCR结果表明LncRNA EGOT在胰腺癌细胞系中表达水平显著上调,可能是PACA的潜在生物标志物。构建稳定转染的PACA细胞系,表型试验的结果显示LncRNA EGOT敲降后的细胞株增殖、迁移和侵袭能力较对照组均明显降低。构建小鼠肿瘤模型,结果显示LncRNA EGOT敲降组的平均肿瘤重量、平均肿瘤体积、肿瘤组织增殖活力均较对照组显著降低,荧光素酶报告基因试验显示在过量表达miR-214的细胞中LncRNA EGOT野生型组的荧光素酶活性显著降低,证实了miR-214与LncRNA EGOT之间相互作用的特异性。检测到miR-214与EGOT和PSL3之间的直接结合相互作用,抑制miR-214足以部分逆转EGOT敲低对PLS3表达和PC细胞增殖和迁移活性的影响。敲降EGOT也抑制了PC肿瘤的体内生长。EGOT、miR-214和PLS3之间的关系在该动物模型系统中得到了证实。结论:我们证实了LncRNA EGOT在PACA细胞系及小鼠体内高表达,PC发展的重要调控因子,提示它可能是该致癌背景下的一个有价值的诊断生物标志物和新的治疗靶点。LncRNA EGOT可以促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移。EGOT、miR-214和PLS3之间特异性结合共同调节PACA的发生进展。