两株地丝霉属真菌发酵产物的分离纯化及结构鉴定研究

作     者：周晓怡 

作者单位：上海中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李医明;刘小宇;张刘强

授予年度：2020年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：真菌 地丝霉属 化学成分 结构鉴定 生物活性 

摘      要：目的:本文通过前期活性筛选得到两株地丝霉属真菌,对其次级代谢产物进行研究,为真菌类中药次级代谢产物的研究积累经验和方法。方法:本文通过抗菌和细胞毒活性筛选得到两株菌株,然后优化两株地丝霉属真菌Geomyces destructans R-S60-1和Geomyces pannorum SA3-2-YM的发酵条件,使用优化后的培养条件对两株菌株进行规模发酵。将两株菌株发酵得到的粗提物采用多种柱色谱分离方法,再结合现代波谱技术,例如核磁、质谱等手段对分离得到的化合物结构进行解析,然后对鉴定得到的化合物进行了抗菌活性和细胞毒活性的检测。此外,通过HPLC分析不同属真菌的粗提物中含色氨酸结构的环二肽类化合物的情况。结果:从Geomyces pannorum SA3-2-YM发酵粗提物中共分离鉴定了13个化合物,分别是cyclo-（L-Trp-L-Pro）（1）,cyclo-（L-Trp-L-Tyr）（2）,cyclo-（Gly-L-Trp）（3）,cyclo-（L-Trp-L-Phe）（4）,cyclo-（L-Trp-L-Ser）（5）,cyclo-（L-Tyr-L-Pro）（6）,cyclo-（LTrp-D-Ile）（7）,cyclo-（D-Ala-D-Trp）（8）,ergosterol（9）,（22E）-5α,8α-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol（10）,anicequol（11）,indazole（12）,p-Hydroxybenzaldehyde（13）,包含八个环二肽类化合物、三个甾体类化合物和两个其他类化合物。其中,化合物1-9、11-13为首次从地丝霉菌属中分离得到。从Geomyces destructans R-S60-1发酵粗提物中共分离鉴定了23个化合物,分别是brevianamide F（14）,cyclo-（L-Trp-DVal）（15）,cyclo-（L-Trp-L-Ile）（16）,cyclo-（D-Trp-D-Ala）（17）,cyclo-（L-Trp-Gly）（18）,cyclo-（L-Trp-L-Ser）（19）,cyclo-（L-Trp-L-Tyr）（20）,melithasterol B（21）,22E-7α-methoxy-5α,6α-epoxyergosta-8（14）,22-dien-3β-ol（22）,inoterpene B（23）,3-methly-6-quinoxalinol（24）,indazole（25）,3-Indole acetic acid（26）,N-[(2-（1H-indol-3-yl）ethyl]acetamide（27）,2-（1-Hydroxyethyl）-4（3H）quinazolinone（28）,1-（5′-O-Acetyl-α-D-arabinofuranosyl）thymine（29）,β-adenosine（30）,5’-dcoxy-5’-methylsulphinyladenosine（31）,butyl-α-D-glucopyranoside（32）,海藻糖（33）,（4E,8E）-N-D-2′-Hydroxypalmitoyl-1-O-β-D-glycopyra-nosyl-9-methyl-4,8-sphingadienine（34）,4-hydroxyphenethyl 2-（4-hydroxyphenyl）acetate（35）,2-（4-hydroxyphenyl）ethanol（36）,包含七个环二肽类化合物、三个甾体和三萜类化合物、八个杂环类化合物及五个其他类化合物。其中,化合物14-36为首次从地丝霉菌属中分离得到。对从两株地丝霉属真菌发酵粗提物中分离得到的化合物1-36进行了抗菌和细胞毒活性的检测。结果表明:从SA3-2-YM菌株发酵粗提物分离得到的化合物中,化合物9对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草杆菌具有一定的抗菌活性,其MIC均为90μg/m L;当化合物浓度为20μg/m L时,除化合物6和11无细胞毒活性外,其他化合物对He La（人宫颈癌细胞）、HepG2（人肝癌细胞）、SMMC-7721（人肝癌细胞）、MCF-7（人乳腺癌细胞）有不同程度的抑制活性,对HepG2细胞株的抑制活性总体表现较好。此外,通过HPLC分析不同属真菌和地丝霉属真菌发酵粗提物,发现选取的其他属真菌的粗提物不能和色氨酸环二肽对照品相对应,初步推测其他属真菌粗提物中不含有色氨酸环二肽。结论:两株地丝霉属真菌采用文中的培养方法得到的次级代谢产物主要为环二肽类、甾体类、杂环类化合物,部分化合物具有一定的细胞毒和抗菌活性,地丝霉属真菌在使用文中培养条件发酵时易产生含色氨酸结构的环二肽类化合物。