NCAPG通过PTEN的CK-Ⅱ依赖性调节促进肝细胞肝癌的增殖

作     者：张荣桂燚 

作者单位：南昌大学 

学位级别：硕士

导师姓名：邬林泉

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：NCAPG 肝细胞性肝癌 增殖 PTEN CKⅡ 

摘      要：目的:浓缩物I复合物中的非SMC亚基（NCAPG）,可以促进肝细胞癌（HCC）的增殖,但机制尚不清楚。本研究的目的是通过探讨NCAPG影响PTEN的机制进而明确NCAPG影响HCC增殖的分子机制。方法:通过Oncomine数据库分析NCAPG在HCC组织及其相应的癌旁组织中的表达差异,使用蛋白质印迹法（western blot）验证HCC组织和相应的癌旁组织中NCAPG的表达量有显著差异。构建裸鼠人肝癌皮下成瘤模型评估NCAPG对HCC细胞体内生长能力的影响。使用转录组测序用于发现NCAPG和PTEN之间的关系。采用蛋白质组学测序和免疫共沉淀（Co-IP）技术,研究NCAPG与CKⅡ之间的蛋白质相互作用。在HCC细胞系MHCC-97H和HCC-LM3中构建NCAPG高表达和低表达细胞模型。运用免疫印迹法、EDU、CCK-8和平板克隆实验研究了NCAPG对HCC细胞的增殖能力的影响。对NCAPG高表达的细胞模型使用PI3K-AKT通路抑制剂Mk2206,运用免疫印迹法、EDU、CCK-8和平板克隆实验研究了NCAPG影响HCC的增殖与PTEN相关。对NCAPG高表达的细胞模型做CKⅡ下调处理,以及对NCAPG低表达的细胞模型做CKⅡ上调处理,运用免疫印迹法研究了NCAPG与CKⅡ、PTEN之间的关系。结果:本实验证实NCAPG在HCC组织中异常过表达,并增强HCC细胞的增殖能力。转录组测序显示NCAPG抑制PTEN的转录并促进PI3K-AKT通路。通过蛋白质组测序,发现NCAPG和CKⅡ之间存在密切联系;Co-IP证实了它们的相互作用。NCAPG与CKⅡ呈正相关,促进PTEN的磷酸化,从而抑制PTEN的转录和功能。本实验还证明CKⅡ是NCAPG引起细胞增殖的关键。结论:本实验结果揭示了NCAPG调控HCC增殖的机制:NCAPG通过与CKⅡ的相互作用抑制PTEN的表达,进而激活PI3K-AKT通路促进HCC的增殖。