救必应和山乌桕的化学成分和药理活性研究

作     者：彭收 

作者单位：中国科学院大学(中国科学院上海药物研究所) 

学位级别：硕士

导师姓名：宣利江

授予年度：2022年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：救必应 抗炎活性 山乌桕 木脂素类寡聚体 脂质吞噬活性 

摘      要：天然产物具有结构新颖和生物活性多样的特点,是药物先导化合物、候选药物和创新药物的重要来源。从中医药中寻找结构新颖的活性天然产物一直是天然药物化学研究的重要方向之一。本文对冬青属植物铁冬青（Ilex rotunda）的干燥树皮（中药名为救必应）和乌桕属植物山乌桕（Sapium discolor）的干燥树皮的化学成分和药理活性进行了系统研究,以期从中得到结构新颖的活性化合物,进而阐明其药效物质基础,为以上两种植物进一步的开发利用提供理论依据。本文利用薄层色谱、柱层析色谱、高效液相色谱等多种色谱技术,从救必应和山乌桕的95%乙醇提取物中共分离出了50个化合物。通过分析1D和2D NMR数据并对比文献数据,鉴定了分离所得的化合物,其中包括10个新化合物和40个已知化合物。从救必应中分离得到的30个化合物分别为15个三萜类化合物（A1-A15）和15个酚类衍生物（A16-A30）,其中化合物A1（3β,23α-dihydroxyurs-12,19（29）-dien-28-oic acid）、A16-A20（rotundosides A-E）、A25-A26（rotundarpenes A-B）为新化合物;对救必应中的量丰成分铁冬青酸（A2）进行了结构修饰,共获得30个衍生物（B1-B30）。从山乌桕中分离得到的20个化合物分别为9个木脂素类寡聚体（S1-S9）和11个其它类化合物（S10-S20）,其中化合物S1（discolorol A）、S10（discoloroside A）为新化合物。基于救必应的传统功效,我们对其抗炎活性展开了研究。利用脂多糖（LPS）诱导的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW264.7细胞）一氧化氮（NO）生成模型对救必应中分离和结构修饰所得的60个化合物进行了初步的抗炎活性筛选,结果表明有20个化合物具有体外抗炎活性,其中化合物A25和A26表现出了显著的体外抗炎活性（10μM浓度下NO抑制率:95.9±4.8%和80.3±5.3%）。通过NO抑制率的大小,对铁冬青酸衍生物的构效关系进行了总结,发现在铁冬青酸的C-3位和C-23位同时引入芳香类基团或在C-28位引入芳香类基团有利于抗炎活性的提升,而酰腙类基团的引入则会导致化合物的细胞毒活性。实时荧光定量反应实验（q RT-PCR）表明,化合物A25和A26均能以浓度依赖的方式降低细胞中炎症因子IL-1β和IL-6的转录水平。基于课题组前期的活性研究,我们发现山乌桕乙醇提取物具有较强的脂质吞噬活性,因此我们对其降脂活性成分进行了进一步的研究。利用人肝癌细胞系（Hep G2）摄取红色荧光标记的低密度脂蛋白（Di I-LDL）活性的体外筛选模型对山乌桕中分离得到的部分化合物进行了体外脂质吞噬活性筛选,化合物S1-S4表现出了微弱的脂质吞噬活性,化合物S5、S6、S12、S13表现出了显著的脂质吞噬活性。