基于RhoA/ROCK信号通路探究隔药饼灸对AS易损斑块兔VCAM-1表达及巨噬细胞含量的影响

作     者：饶泽华 

作者单位：湖南中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：岳增辉

授予年度：2022年

学科分类：1005[医学-中医学] 100512[医学-针灸推拿学] 10[医学] 

主      题：隔药饼灸 动脉粥样硬化 易损斑块 RhoA/ROCK VCAM-1 巨噬细胞 

摘      要：目的:通过观察隔药饼灸对动脉粥样硬化兔腹主动脉中Rho A/ROCK信号通路及血管细胞黏附因子（VCAM-1）表达和巨噬细胞含量的影响,探究隔药饼灸稳定动脉粥样硬化易损斑块的可行性和作用机制。方法:70只普通级雄性新西兰兔（2000±200g）普通饲料喂养一周后随机分成10只空白组和60只造模组。造模组在高脂饲养的基础上采用腹主动脉球囊损伤术加基因转染及药物触发斑块破裂制作AS易损斑块兔模型。球囊损伤术后存活兔再用随机数字表法分成模型组（11只）、隔药饼灸组（11只）、直接灸组（11只）、阿托伐他汀组（11只）、Rho激酶抑制剂组（11只）。空白组、模型组捆绑相同时间,不干预。直接灸组兔捆绑后行直接灸干预。隔药饼灸组兔捆绑后行隔药饼灸干预。阿托伐他汀组将阿托伐他汀钙片（1.96mg/kg）打磨成粉拌入兔每天的高脂饲料,每日捆绑相同时间,不施灸。Rho激酶抑制剂组经兔耳缘静脉注射抑制剂盐酸法舒地尔（10mg/kg）,每日捆绑相同时间,不施灸,所有干预每日一次,共持续8周。ELISA检测兔血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、载脂蛋白A（APO-A）、载脂蛋白B（APO-B）含量;HE染色观察兔腹主动脉病理形态结构改变;免疫组化法检测兔腹主动脉中Ras同源物基因组成员A/Rho激酶（Rho A/ROCK）和血管细胞黏附因子（VCAM-1）抗原活性以及巨噬细胞（MOMA-2）的含量。结果:1.血脂六项:与空白组比较,模型组兔血清TC、TG、LDL、APO-B含量显著升高,HDL、APO-A含量显著下降（P0.01）;与模型组比较,各治疗组兔血清TC、TG、LDL、APO-B含量显著下降,HDL、APO-A含量显著升高（P0.01,P0.05）;与直接灸组比较,隔药饼灸组兔血清APO-B含量显著下降（P0.01）;与隔药饼灸组比较,阿托伐他汀组兔血清APO-B含量增加（P0.05）。说明三个治疗组在调节血脂方面疗效显著。在APO-B的调节方面隔药饼灸效果最佳,优于直接灸和阿托伐他汀。隔药饼灸治疗可改善血脂从而达到抗AS稳定斑块的作用。2.HE染色:与空白组比较,模型组血管内皮组织结构异常,内膜可见泡沫细胞堆积形成脂质池而增厚,可见斑块形成并向管腔内突起致管腔狭窄,斑块破裂出血可见多个出血点且管腔有血栓形成,中膜弹力纤维挤压聚集,平滑肌细胞向内膜迁移数量减少。与模型组比较,直接灸组和隔药饼灸组腹主动脉内膜损伤程度相当,脂质池较小,未见斑块破裂和血栓形成。阿托伐他汀组内膜增生较少,未见板块出血和血栓形成,中膜损伤较小弹力纤维结构稳定,平滑肌细胞形态完好,排列整齐。说明隔药饼灸可抑制血管内膜增生,减少脂质累积,维护血管内皮结构和功能,达到抗AS稳斑的作用。3.Rho A、ROCK、VCAM-1表达量:与空白组比较,模型组兔细胞Rho A、ROCK、VCAM-1抗原活性显著升高（P0.01）;与模型组比较,各干预组（直接灸组、隔药饼灸组、阿托伐他汀组、Rho激酶抑制剂组）兔细胞Rho A、ROCK、VCAM-1抗原活性显著下降（P0.01）。各干预组组间差异不显著（P0.05）。说明隔药饼灸、直接灸和阿托伐他汀三种干预与Rho激酶抑制剂效果相当,均能显著抑制Rho A、ROCK信号通路并降低VCAM-1表达。4.巨噬细胞含量:与空白组比较,模型组兔细胞MOMA-2抗原活性显著升高（P0.01）;与模型组相比,各干预组兔细胞MOMA-2抗原活性显著下降（P0.01）。各干预组组间差异不显著（P0.05）。说明隔药饼灸、直接灸和阿托伐他汀均能显著减少巨噬细胞含量,且疗效相当。结论:1、隔药饼灸可改善AS兔血脂与载脂蛋白含量。2、隔药饼灸可延缓AS兔腹主动脉内膜增生,维护血管内皮形态与功能,稳定易损斑块。3、隔药饼灸可通过抑制Rho A/ROCK信号通路降低VCAM-1表达,减少巨噬细胞含量,稳定易损斑块,发挥抗AS的作用。