miR-3127-5p调控黄芩素对宫颈癌细胞凋亡作用机制的初步研究

作     者：王明艳 

作者单位：西南医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：喻小兰

授予年度：2022年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：宫颈癌 黄芩素 miR-3127-5p 凋亡 

摘      要：目的:探索miR-3127-5p对宫颈癌Hela细胞的作用,以及miR-3127-5p调控黄芩素对宫颈癌细胞凋亡作用机制,以期进一步提供中药黄芩治疗宫颈癌的医学证据,为黄芩在宫颈癌治疗中的使用提供分子生物学理论指导,促进中医药在肿瘤治疗方面的发展。方法:明确miR-3127-5p对宫颈癌Hela细胞的作用:通过瞬时细胞转染技术对Hela细胞进行转染,设立五个组,即空白对照组、miR-3127-5p过表达组、miR-3127-5p低表达组及对应空载体组（mimic NC、inhibitor NC）,分别应用划痕愈合实验观察Hela细胞迁移能力的差异;流式细胞术观察Hela细胞凋亡率的差异;采用蛋白免疫印迹（Western-blot）实验测验Hela细胞中与凋亡有关的蛋白表达水平的差异。探索miR-3127-5p调控黄芩素对宫颈癌Hela细胞凋亡的作用机制:首先通过CCK-8实验检测黄芩素对Hela细胞的最佳作用浓度及时间,再进行细胞转染及黄芩素干预设立四组对照:空白组、仅黄芩素组、miR-3127-5p过表达+黄芩素组和空载体+黄芩素组,分别应用划痕愈合实验观察Hela细胞迁移能力的差异;流式细胞术观察Hela细胞凋亡率的差异;采用蛋白免疫印迹（Western-blot）实验测验Hela细胞中与凋亡有关的蛋白表达水平的差异。结果:1、上调miR-3127-5p表达促进了 Hela细胞凋亡:通过划痕愈合实验可知:与空白对照组、空载体组相比,miR-3127-5p的高表达水平抑制了 Hela细胞划痕愈合,miR-3127-5p低表达促进了 Hela细胞划痕愈合;流式细胞术检测结果表示:与空白组、空载体组相比,miR-3127-5p过表达组抑制了 Hela细胞凋亡,miR-3127-5p低表达组促进了 Hela细胞凋亡;蛋白免疫印迹实验结果表示:同空白对照组、空载体组对比,miR-3127-5p高表达组中与凋亡有关的蛋白Caspase-9、Caspase-3和BAX表达量增加,Bcl-2 表达减少,miR-3127-5p 低表达组中 Caspase-9、Caspase-3 和 BAX 表达减少,Bcl-2表达水平上调;2、CCK-8实验可知:在所测黄芩素浓度及作用时间范围内,黄芩素能促进宫颈癌Hela细胞的凋亡,且Hela细胞对黄芩素具有浓度及时间依赖性;3、miR-3127-5p过表达增加了黄芩素促宫颈癌Hela凋亡的作用:四组细胞对比,划痕愈合实验结局显示:miR-3127-5p过表达+黄芩素组抑制了 Hela细胞划痕愈合;流式细胞术检测结果表示:miR-3127-5p过表达+黄芩素组促进了 Hela细胞凋亡;蛋白免疫印迹实验结果表示:miR-3127-5p过表达+黄芩素组中Caspase-9、Caspase-3和BAX蛋白量增加,Bcl-2蛋白表达量减少。结论:上调miR-3127-5p的表达量会促进宫颈癌Hela细胞的凋亡,下调miR-3127-5p的表达量会阻止宫颈癌Hela细胞的凋亡;在所测黄芩素浓度及作用时间范围内,黄芩素能促进宫颈癌Hela细胞的凋亡,且Hela细胞对黄芩素具有浓度及时间依赖性;miR-3127-5p过表达提高黄芩素对宫颈癌Hela细胞的促凋亡作用,增加了宫颈癌Hela细胞对黄芩素的敏感性。