GM-CSF/G-CSF诱导髓系祖细胞分化机制研究

作     者：刘富饶 

作者单位：上海交通大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李栋

授予年度：2018年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

主      题：髓系祖细胞 GM-CSF 巨噬细胞分化 mTOR 自噬 G-CSF 中性粒细胞 NLRP12 NF-κB ERK1/2 

摘      要：研究目的:造血干细胞来源的髓系祖细胞最终能够分化为一系列成熟的血细胞成分,其中就包括了单核巨噬细胞。巨噬细胞的功能对机体稳态的维持至关重要,它的分化缺失将导致机体的免疫缺陷。对于巨噬细胞分化过程的研究为治疗血液疾病提供了基础。本课题的目的是探索影响巨噬细胞分化的主要机制。研究内容:研究在粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）诱导的巨噬细胞分化中,m TOR信号通路对该过程的影响,以及m TOR信号通路下游的自噬通路如何在巨噬细胞分化中发挥作用。研究方法:通过流式细胞术以及定量PCR确定巨噬细胞分化模型的建立,在GM-CSF刺激下,加入m TOR信号通路以及自噬相关抑制剂或激动剂,检测分化相关分子的变化,并采用western blot,免疫荧光等技术验证m TOR信号通路以及自噬对分化的影响。研究结果:在GM-CSF诱导的巨噬细胞分化过程中,m TOR信号通路被激活,同时自噬被抑制,相较于对照组,巨噬细胞分化增强。结论:在巨噬细胞分化中,GM-CSF能够激活m TOR信号通路,同时m TOR信号通路下游的自噬通路受到抑制,从而促进巨噬细胞的分化。研究目的:中性粒细胞是固有免疫的系统中发挥重要作用的部分,它来源于髓系祖细胞。中性粒细胞的异常增多或减少均能诱发血液疾病的发生,因此从髓系祖细胞到中性粒细胞的分化是研究如何预防和治疗血液疾病的关键过程。本课题的目的就是探索影响中性粒细胞分化过程的相关分子以及信号通路,从而为造血分化研究提供新的靶点,将为血液疾病研究提供新的思路。研究内容:研究在粒细胞-集落刺激因子（G-CSF）诱导的中性粒细胞分化中,NLRP12基因对该过程的影响,以及NLRP12如何通过非经典的NF-κB通路和ERK1/2通路在中性粒细胞分化中发挥作用。研究方法:通过流式细胞术以及定量PCR确定中性粒细胞分化模型的建立,通过干扰片段抑制NLRP12基因,通过western blot、定量PCR等实验技术检测其干扰效率。检测NF-κB通路和ERK1/2通路关键分子的变化,以及细胞分化标志的改变。研究结果:在G-CSF诱导的中性粒细胞分化过程中,NLRP12基因随着细胞的分化的增强表达升高。NLRP12表达的缺失会抑制非经典的NF-κB信号通路,却激活了ERK1/2通路,中性粒细胞的分化被抑制。结论:NLRP12通过调控非经典的NF-κB信号通路和ERK1/2通路促进小鼠中性粒细胞分化。