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nlrp12基因突变导致自身炎症性疾病及其机制研究

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NLRP12基因突变导致自身炎症性疾病及其机制研究

作者：李悦重庆医科大学

学位级别：硕士

背景:Nod样受体家族含pyrin结构域蛋白12（Nod-like receptor family pyrin domain-containing protein 12,nlrp12）是近年来新发现的NOD样受体（NOD-like receptors,NLRs）家族成员,是一种重要的模式识别受体,它能够识别多种病原体,激活下游的免疫应答,调节机体多种炎症反应。nlrp12相关自身炎症性疾病（nlrp12-associated autoinflammatory disease,nlrp12-AID）是一种由nlrp12基因突变引起的罕见常染色体显性遗传疾病。其临床表现主要为反复发作的发热、皮疹以及关节炎等。既往报道显示冷刺激是疾病的重要诱因。迄今为止,世界范围内发现的nlrp12-AID患者数量较少,已知的临床表型及相关遗传数据十分有限,具体的致病机制也尚不明晰。目的:分析携带nlrp12突变患者的临床表现及免疫学特征,探索突变导致疾病炎症反应增强的机制,旨在为nlrp12-AID患者的临床诊疗提供新思路。方法:收集整理临床资料,总结患者的临床特点,并通过二代测序（Next-generation sequencing,NGS）验证nlrp12突变的存在。分析突变位点的保守性,运用PROVEAN、SIFT、Mutation Taster和Mut Pred2等多种生物信息学算法对突变造成的蛋白功能损伤进行预测。使用SWISS-MODEL及Pymol预测蛋白质三维结构,模拟突变后蛋白空间结构及氢键的改变。在公开数据库（1000 genomes、ESP6500、Ex AC以及Ex AC-EAS）中查询新发现突变的最小等位基因频率（Minor allele frequencies,MAF）,并根据ACMG遗传变异分类标准对其进行致病性评估。运用蛋白质免疫印迹试验（Western blot,WB）检测患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）中nlrp12蛋白表达。同时,检测患者血浆内以及PBMCs刺激后产生的细胞因子水平。构建nlrp12野生型和突变体质粒,转染工具细胞,通过WB检测细胞系中突变对蛋白表达量的影响。此外,通过体外荧光素酶报告基因方法检测nlrp12突变体对NF-κB信号转导通路的影响。最后,对历年来报道的nlrp12突变位点及nlrp12-AID进行文献回顾,并对其整理归纳。结果:本研究首先对10例携带不同突变的nlrp12-AID患者的临床特征进行了总结归纳。患者主要表现为周期性发热或关节炎,1例表现为未报道过的冷暴露后出现的雷诺现象。二代测序验证了6个突变位点,其中2个为新发现的无义突变位点,均为杂合突变。突变多为错义突变,此外包括1个移码突变和1个无义突变。免疫印迹法结果显示无义突变的蛋白表达量有一定程度降低,而错义突变对蛋白质表达水平没有显著影响。除此之外,患者血浆内及细胞刺激后上清中的细胞因子含量升高,体外实验结果也提示nlrp12突变对NF-κB信号通路的抑制作用造成了一定影响。同时通过文献回顾,我们整理了目前报道的nlrp12突变位点及相对应的临床表型,从主要症状、发病年龄、种族差异等方面总结归纳了nlrp12-AID的临床特点。结论:我们的发现扩展了nlrp12-AID的临床疾病谱和基因图谱,进一步佐证了疾病具有较高的临床异质性。而nlrp12突变使其对NF-κB信号通路的抑制功能受损,可能在一定程度上导致了该疾病的过度炎症表现。

关键词： nlrp12 nlrp12相关自身炎症性疾病 NF-κB 家族性寒冷自身炎症综合征2型自身炎症性疾病

nlrp12调控NF-κB通路在臭氧诱导小鼠肺部炎性损伤中的作用与机制

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NLRP12调控NF-κB通路在臭氧诱导小鼠肺部炎性损伤中的作用与机制

作者：李梦圆郑州大学

学位级别：硕士

我国近地面臭氧(Ozone,O)污染问题日益凸显,大量研究显示高浓度O暴露与炎性呼吸系统疾病发生密切相关。nlrp12是NOD样受体(NOD-like receptor)家族的成员,常通过调节经典或非经典NF-κB信号通路,在炎症或肿瘤中发挥负向调控作用。但NLR... 详细信息

我国近地面臭氧(Ozone,O)污染问题日益凸显,大量研究显示高浓度O暴露与炎性呼吸系统疾病发生密切相关。nlrp12是NOD样受体(NOD-like receptor)家族的成员,常通过调节经典或非经典NF-κB信号通路,在炎症或肿瘤中发挥负向调控作用。但nlrp12在O所致肺部炎性损伤中的作用与机制尚未见报道。目的探讨nlrp12在O诱导小鼠肺部炎性损伤中的作用,及其是否通过调控经典或非经典NF-κB信号通路发挥作用,为预防或治疗O所致炎性呼吸系统疾病提供理论依据。方法1.通过真气网收集郑州市2017-2019年O污染数据,分析O作为郑州市首要污染物情况、O-8 h平均浓度情况并通过O-1 h浓度分析O日变化趋势,为选择动物实验中O暴露剂量和时间提供依据。2.将SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为4组,每组6只,分别进行过滤空气(Filtered Air,FA)和低(0.25 ppm)、中(0.50 ppm)、高(1.00 ppm)浓度O暴露,3 h/d,共5 d。暴露结束后24 h,采用小动物肺功能仪检测各组小鼠气道阻力(Rrs)、组织损伤(G)和组织弹性(H)。HE、PAS和MASSON染色观察肺组织病理学改变,采用细胞计数和BCA法检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中总白细胞数和总蛋白水平;q PCR及ELISA分别检测肺组织和BALF中细胞炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1βm RNA和蛋白表达。q PCR及免疫组化、Western Blot检测肺组织nlrp12 m RNA和蛋白表达,免疫荧光和/或Western Blot检测肺组织中经典NF-κB通路关键蛋白p-P65、p-IRAK1、p-IκBα和非经典NF-κB通路关键蛋白P100/P52表达。3.采用快速吸入式气管滴注给药系统将nlrp12过表达腺病毒(Adenovirus,Ad)灌入小鼠肺中,选择发生肺部炎性损伤最严重的1.00 ppm O进行暴露,暴露方法同上。并以上述方法检测nlrp12过表达后,O暴露的小鼠肺部炎性损伤指标,包括Rrs、G、H和HE、PAS、MASSON染色和白细胞计数、总蛋白水平和细胞炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β表达。Western Blot检测经典NF-κB通路关键蛋白p-P65、p-IRAK1和p-IκBα表达。结果1.2017-2019年中,O作为郑州市首要污染物天数分别是99、123、141天,主要集中在夏季;O-8 h平均浓度在每年6月均有超过20天超标;O日变化主要在每天14:00-17:00达到峰值,最高达到317μg/m。该结果为O暴露小鼠实验提供剂量和时间选择依据。2.与FA组相比,O暴露组小鼠的Rrs、G、H发生不同程度的增高;且O暴露组小鼠肺部出现炎性细胞浸润、支气管壁增厚、杯状细胞增生及纤维化;与FA组相比,1.00 ppm O组小鼠的白细胞计数、总蛋白浓度及肺组织和BALF中炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β表达均显著升高(Pnlrp12表达下降,特别是1.00 ppm O组最显著(Pnlrp12-Ad转染后,与空白载体组相比,Ad组小鼠肺部nlrp12表达明显升高(Pnlrp12过表达后O暴露组小鼠Rrs、G、H发生不同程度的降低,炎性细胞浸润、支气管壁增厚、杯状细胞增生和纤维化情况明显减轻,白细胞计数和总蛋白浓度明显降低,肺组织和BALF中细胞炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β表达均明显降低;经典NF-κB通路关键蛋白p-P65、p-IRAK1和p-IκBα表达同样下降(P均nlrp12能够抑制O诱导的小鼠肺部炎性损伤,其可能通过负向调节经典NF-κB信号通路发挥作用。

关键词：臭氧肺部炎性损伤 nlrp12 经典NF-κB通路

nlrp12基因突变克罗恩患者对IL-4表达的影响

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现代消化及介入诊疗 2023年第8期28卷 981-985页

作者：黄杨杨青青肖雪怡吴旭东徐州医科大学盐城临床学院盐城市第一人民医院消化内科224000

目的本研究旨在探讨核苷酸结合结构域和富含亮氨酸重复结构域的受体12(nlrp12)突变的三例近亲克罗恩病(CD)患者的相关炎症因子的变化。方法将受试者分为两组:健康对照组和nlrp12突变CD病人组,观察各组相关炎症因子表达。结果血常规表明... 详细信息

目的本研究旨在探讨核苷酸结合结构域和富含亮氨酸重复结构域的受体12(nlrp12)突变的三例近亲克罗恩病(CD)患者的相关炎症因子的变化。方法将受试者分为两组:健康对照组和nlrp12突变CD病人组,观察各组相关炎症因子表达。结果血常规表明两组患者外周血单核细胞数量并无明显差异。(P>0.05)。RT-PCR、WB、ELISA、IHC发现CD组IL-4 mRNA及蛋白表达较其他两组减少(Pnlrp12突变的CD患者们的单核巨噬细胞中低表达,则可从此方面去寻求治疗切入点。

关键词： nlrp12 IL-4 克罗恩病单核巨噬细胞基因突变

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nlrp12在糖尿病并发冠心病患者的作用分析

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中华内分泌外科杂志 2020年第5期14卷 411-415页

作者：张婧隋国良烟台市烟台山医院内分泌科 264001

目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白12(nucleotide binding oligomerization domain like receptor protein 12,nlrp12)在糖尿病并发冠心病患者中的作用。方法选取2018年6月至2019年10月烟台市烟台山医院内分泌科收治的单纯2型... 详细信息

目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白12(nucleotide binding oligomerization domain like receptor protein 12,nlrp12)在糖尿病并发冠心病患者中的作用。方法选取2018年6月至2019年10月烟台市烟台山医院内分泌科收治的单纯2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者40例为单纯糖尿病组,冠心病患者80例为单纯冠心病组,T2DM合并冠心病患者80例为糖尿病并发冠心病组,同期体检的健康人60例为对照组。分离并培养外周血单核细胞,RT-PCR和Western blot检测nlrp12、凋亡相关斑点样蛋白、Caspase-3mRNA和蛋白表达水平。分离血浆,酶联免疫吸附法检测IL-18含量。结果单纯糖尿病组、单纯冠心病组、糖尿病并发冠心病组患者外周血单核细胞中nlrp12、凋亡相关斑点样蛋白、Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量明显高于对照组,差异有统计学意义(Pnlrp12 mRNA和蛋白相对表达量在单纯糖尿病组、单纯冠心病组、糖尿病并发冠心病组中差异无统计学意义(P>0.05)。单纯糖尿病组、单纯冠心病组、糖尿病并发冠心病组血浆IL-18水平明显高于对照组,差异有统计学意义(Pnlrp12、凋亡相关斑点样蛋白、Caspase-3mRNA和蛋白相对表达量均呈正相关。结论nlrp12异常激活通过活化凋亡相关斑点样蛋白和Caspase-3表达,促进其下游炎症因子IL-18的成熟与释放,参与糖尿病并发冠心病的发生与发展。

关键词： nlrp12 2型糖尿病冠心病 IL-18

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nlrp12与炎症性肠病

生命的化学 2016年第6期36卷 897-901页

作者：赵宝连马蓓第二军医大学基础医学实验教学中心上海200433

核苷酸结合结构域和富含亮氨酸重复结构域的受体(nucleotide-binding domain leucine-rich repeat-containing receptors,NLR)是一类胞内的免疫感受元件家族,它们能够通过识别病原和损伤相关分子从而形成炎性小体,激活caspase-1,参与病... 详细信息

核苷酸结合结构域和富含亮氨酸重复结构域的受体(nucleotide-binding domain leucine-rich repeat-containing receptors,NLR)是一类胞内的免疫感受元件家族,它们能够通过识别病原和损伤相关分子从而形成炎性小体,激活caspase-1,参与病原体感染以及细胞损伤引起的炎症反应。nlrp12是最近鉴定出的NLR家族的成员,一些研究认为nlrp12与炎症性肠病(IBD)有密切的关系,而且nlrp12可能对肠炎的发生发展起双重性作用。因此,本文主要对nlrp12与炎症性肠病的研究进展予以综述,分别对nlrp12的结构和功能进行介绍,并进一步探讨了nlrp12在IBD的作用及可能机制,为人们认识、研究和治疗IBD提供了新思路。

关键词： nlrp12 炎症性肠病(IBD) 溃疡性结肠炎克罗恩病

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nlrp12在酒精诱导的急性肝损伤中的作用与机制研究

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NLRP12在酒精诱导的急性肝损伤中的作用与机制研究

作者：张亚飞安徽医科大学

学位级别：硕士

背景酒精诱导的急性肝损伤（alcohol-induced acute liver injury,ALI）是一种因长期大量饮酒引起的肝脏损伤,其以肝脏结构与功能的破坏和紊乱为特征,因常伴有过度的炎症反应,有时也被称为酒精性肝炎。研究表明由酒精及其代谢物引起的... 详细信息

背景酒精诱导的急性肝损伤（alcohol-induced acute liver injury,ALI）是一种因长期大量饮酒引起的肝脏损伤,其以肝脏结构与功能的破坏和紊乱为特征,因常伴有过度的炎症反应,有时也被称为酒精性肝炎。研究表明由酒精及其代谢物引起的肝脏内巨噬细胞（也被称为枯否细胞,Kupffer cells）的激活与大量炎症因子的释放是导致酒精性肝损伤发生发展不可或缺的因素。在酒精性肝损伤中,酒精作为重要的损伤诱因,可通过激活多种免疫感受体,进而激活肝脏巨噬细胞中的炎症信号通路,诱发大量炎症因子尤其是促炎因子的转录与合成,而炎症因子的大量存在会进一步加速酒精性肝病（alcoholic liver disease,ALD）的进程。在炎症反应的发生过程中,免疫感受体家族NOD样受体（NOD-like receptor）一直是研究的热点,多种NOD样受体家族成员在炎症反应的发生、进展、调控等方面扮演着重要角色,其中NOD样受体家族成员nlrp12在多种肿瘤与免疫疾病中的炎症调控作用被广泛研究,因此为本课题的引入提供了思路。本课题致力于nlrp12在酒精诱导的急性肝损伤中对酒精诱导的肝损伤、脂肪变性、巨噬细胞炎症因子分泌的调控作用、可能的存在机制及对肝细胞凋亡的影响,以期为此类疾病的防治提供新的研究思路。目的:（1）探究nlrp12在酒精诱导的小鼠急性肝损伤模型中对肝损伤、脂肪变性、巨噬细胞分泌炎症因子的调节作用与可能的机制;（2）探究nlrp12对炎症反应的调节作用对肝细胞凋亡的影响方法:（1）体内实验,将小鼠随机分为6组:对照液体饲料喂养组（CD-fed）,酒精液体饲料喂养组（EtOH-fed）,对照液体饲料喂养+腺病毒空载体组（CD-fed+Ad-EGFP）,酒精液体饲料喂养+腺病毒空载体组（EtOH-fed+Ad-EGFP）,对照液体饲料喂养+腺病毒nlrp12过表达组（CD-fed+Ad-nlrp12-EGFP）,酒精液体饲料喂养+腺病毒nlrp12过表达组（EtOH+Ad-nlrp12-EGFP）。各组小鼠均为雄性,造模开始前体重不低于20g。小鼠的造模周期均为15天,共同包括了5天的适应期喂养（给予对照液体饲料）,从第6天开始,造模组的小鼠给予含有5%无水乙醇的酒精液体饲料,而未进行造模的组别则继续食用对照饲料,所用液体饲料现用现配且保持足量。第16天早上7时,包含有酒精液体饲料喂养的小鼠给予20%的酒精灌胃,灌胃量按照体重换算（5g/kg）,对照液体饲料喂养的小鼠则给予生理盐水灌胃,9h后处死小鼠,取血放于-80摄氏度中用于测定肝损伤指标如ALT,AST以及炎症因子如TNF-α、IL-6、IL-1β水平;取部分肝组织及原代枯否细胞检测nlrp12及炎症因子m RNA和蛋白表达;取原代肝细胞检测凋亡率;取部分肝组织包埋后制成石蜡或冰冻切片进行免疫荧光双染、油红染色、HE染色以检测肝脏的脂肪变性和损伤情况。（2）体外实验,使用50m M的酒精诱导活化RAW 264.7细胞,首先对此浓度诱导下的细胞上清中炎症因子的含量进行测定,其次提取蛋白和RNA进行nlrp12的表达量分析;体外使用nlrp12-si RNA沉默nlrp12以及腺病毒过表达nlrp12后,Western blot,qRT-pcr,Elisa检测炎症因子水平,nlrp12蛋白及m RNA表达以及NF-κB通路相关蛋白的表达;分别将过表达及沉默nlrp12后RAW264.7细胞的上清液培养AML-12细胞24h,检测AML-12细胞的凋亡率,探究nlrp12对炎症的调节作用是否影响了AML-12细胞的凋亡。结果:（1）体内实验结果:造模完成后,对各组小鼠的血清学指标,病理学指标,炎症因子的水平进行分析。与对照液体饲料喂养组相比,酒精液体饲料喂养组小鼠显示出明显的肝脏损伤,脂肪变性以及炎症因子水平的升高,显示模型建立成功。相比较于对照液体饲料喂养组小鼠,酒精液体饲料喂养组小鼠肝脏中nlrp12蛋白及m RNA表达上升;免疫组化分析显示nlrp12在酒精液体饲料喂养组小鼠肝脏高表达;免疫荧光双染的结果显示nlrp12与巨噬细胞表面标记物CD68存在共定位现象;与相应对照组相比,腺病毒在体过表达nlrp12后,病理切片染色及血清肝损伤指标的分析结果显示肝脏脂肪变性和损伤程度减轻,此外炎症因子的水平及原代肝细胞的凋亡率也明显降低。（2）体外实验结果:相比较于对照组（酒精浓度为0 m M）,50m M酒精刺激RAW264.7细胞24h后,nlrp12和多种炎症因子的表达水平明显增加;在RAW264.7细胞中过表达nlrp12后,炎症因子的水平明显下降,而沉默nlrp12后,炎症因子的水平上升明显,进一步研究发现nlrp12的表达变化显著影响了NF-κB通路中相关蛋白的表达。此外,在RAW264.7细胞中过表达nlrp12,取上清液培养AML-12细胞,AM

关键词：酒精性肝损伤 nlrp12 NF-κB信号通路凋亡

nlrp12基因SNP及表达对家兔非特异性消化道紊乱的影响

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NLRP12基因SNP及表达对家兔非特异性消化道紊乱的影响

作者：刘云福四川农业大学

学位级别：硕士

随着家兔规模化养殖的迅猛发展,消化道疾病成为危害最大的疾病之一。其中家兔非特异性消化道紊乱(non-specific digestive disorder,NSDD)是目前发病率高的疾病之一,其显著的临床症状是腹泻。目前的防治措施效果较差,前人研究表明,遗传... 详细信息

随着家兔规模化养殖的迅猛发展,消化道疾病成为危害最大的疾病之一。其中家兔非特异性消化道紊乱(non-specific digestive disorder,NSDD)是目前发病率高的疾病之一,其显著的临床症状是腹泻。目前的防治措施效果较差,前人研究表明,遗传因素在肠炎的发生过程具有重要的作用。nlrp12(NLR family,pyrin domain containing12)基因参与炎症因子的调控过程,对炎症的发生具有抑制作用。本试验采用直接测序法检测nlrp12基因编码区(CDS)单核苷酸变异位点。针对氨基酸改变的SNP位点,采用在线分析软件PANTHER预测SNP产生的风险以及发生风险的概率,筛选出影响nlrp12功能的关键SNP位点。采用SSCP技术对539个不同健康状况的样本(其中患病组：n=272,健康组：n=267)进行基因分型,采用case-control方法对nlrp12基因c.1682位点SNP和NSDD易感性进行关联分析,并分析nlrp12基因在不同健康状况及不同基因型下mRNA表达差异性。结果如下：1、通过PCR产物直接测序法,发现nlrp12基因CDS区存在19个cSNP位点,包括5个非同义cSNP和14个同义cSNP。五个非同义cSNP分别为：c.223C>T,c.1279A>G,c.1682A>G,c.2267G>A,c.2800T>G,这些cSNP导致的氨基酸变化分别为p.Arg75Cys,p.Thr427A1a,p.His561Arg,p.Ser756Asn,p.Ser934A1a。其中c.1279A>G和c.1682A>G位于第3外显子,这个区域编码该蛋白质的核苷酸结合区域。在所检测到的5个非同义突变SNP中,采用在线软件PANTHER,模拟分析SNP的风险及发生风险的概率,结果显示五个cSNP产生的风险不同。为了寻找家兔NSDD发生的关键SNP位点,我们选择具有最小风险值(subPSEC value=-5.6218)的位点(c.1682A>G),进行case-control关联分析。2、针对nlrp12基因编码区c.1682A>G SNP位点,采用SSCP技术对试验样本进行基因型分型(其中NSDD组：n=272,健康组：n=267)。统计分型结果,等位基因c.1682A和c.1682G在NSDD组的基因频率为48.53%和51.47%,在健康组的基因频率为54.87%和45.13%。AG基因型频率在Case和Control组中都是最高(47.8%、56.6%),AG为优势基因型。采用case-control方法进行关联性分析,结果表明等位基因c.1682A对NSDD具有保护作用,能够抑制NSDD的发生(OR=0.884,95%置信区间为0.788-0.993,Pnlrp12mRNA表达量进行定量分析,结果表明：随着炎症程度的加剧,三个组织中nlrp12mRNA表达量依次减少,健康组中表达量最高,严重NSDD组表达量最低。其中,圆小囊和回肠中,健康组和严重组之间的差异达到显著水平(Pnlrp12mRNA表达量存在差异,AA基因型个体nlrp12mRNA的表达量最高,GG基因型表达量最低。AA基因型和GG基因型表达差异在结肠和圆小囊中达到显著水平(Pnlrp12参与到家兔NSDD的调控过程,但具体的分子机制尚不清楚。通过case-control关联分析和定量表达分析,nlrp12基因cSNP和NSDD易感性存在相关,这可以为以后蛋白功能研究提供理论依据。因此,nlrp12可以作为家畜抗病育种的候选基因,加速抗病育种过程的进程。

关键词：家兔非特异性消化道紊乱(NSDD) nlrp12 cSNP case-control分析

nlrp12与肠癌侵袭性、迁移能力及耐药性的关系

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NLRP12与肠癌侵袭性、迁移能力及耐药性的关系

作者：潘国锋苏州大学

学位级别：硕士

研究目的:为了研究炎症因子nlrp12在结直肠癌肿瘤形成中的作用以及它对于结直肠癌细胞化疗药物耐药性的影响。方法:在我们本次实验中,我们通过免疫组织化染色法测得了57例结直肠癌病人肠癌组织及癌旁组织中的nlrp12的蛋白量。采用Wester... 详细信息

研究目的:为了研究炎症因子nlrp12在结直肠癌肿瘤形成中的作用以及它对于结直肠癌细胞化疗药物耐药性的影响。方法:在我们本次实验中,我们通过免疫组织化染色法测得了57例结直肠癌病人肠癌组织及癌旁组织中的nlrp12的蛋白量。采用Western blotting和实时定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction)测得肠癌组织及细胞中的nlrp12蛋白和m RNA的含量。通过转录siRNA进入HCT116细胞中,从而检测nlrp12对于肠癌细胞增殖能力、迁移能力和化疗药物耐药性的影响。结果:与癌旁组织相比,结直肠癌组织中的nlrp12蛋白水平明显降低了。并且肠癌组织中的nlrp12蛋白水平的变化与临床指标如肿瘤大小、TNM分期和Dukes分期等存在着密切的联系。另外,下调了nlrp12的水平之后,HCT116细胞的增殖能力和迁移能力均有所增强,同时这些细胞对于顺铂的耐药性也有显著的提升。在体外实验中,nlrp12表现出对于磷酸化ERK信号通路和GLI1信号通路的负性调节。通过使用MEK抑制剂U0126可以阻断nlrp12对于GLI1的作用。结论:nlrp12在结直肠癌肿瘤形成的过程中可能起到了重要的作用。因此,nlrp12有作为治疗结直肠癌靶点的潜力。核心提示:在我们这次实验中,我们检测了57例结直肠癌患者肠癌组织及对应的癌旁组织中nlrp12的表达量,研究了nlrp12表达量与病人临床参数之间的联系。通过用siRNA下调了肠癌细胞中nlrp12的表达量之后,发现癌细胞的增殖能力、迁移能力和药物敏感性均有明显的提升。nlrp12通过MAPK信号通路来控制GLI1的活化。本次实验说明了nlrp12也许可以作为一个新的治疗结直肠癌的靶点。

关键词： nlrp12 siRNA 增殖耐药性 GLI1 结直肠癌

布鲁氏菌病急、慢性期患者外周血中NLRC4及nlrp12的表达水平及其意义

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布鲁氏菌病急、慢性期患者外周血中NLRC4及NLRP12的表达水平及其...

作者：刘丹内蒙古医科大学

学位级别：硕士

目的:研究所有研究对象外周血中NLRC4(the NOD-like receptor family CARD domaincontaining protein 4,Nod样受体家族蛋白4)、nlrp12(the NOD-like receptor family pyrin domain-containing protein 12,Nod样受体家族蛋白12)、Caspase-1(Cysteinyl aspartate specific proteinase 1,半胱氨酸依赖性天冬氨酸蛋白酶1)及ASC(apoptosisassociated speck-like protein containing a CARD,凋亡相关的斑点样蛋白)m RNA的相对表达量在急、慢性期患者及健康人群中的差异及其意义,进一步探讨NLRC4和nlrp12在人体抗布鲁氏菌感染过程中参与的免疫学机制。方法:收集于内蒙古疾病预防控制中心筛查并且确诊的布鲁氏菌病患者,根据国家布鲁氏菌病诊断标准(WS269-2019)收集急性期患者20例,慢性期患者20例,与此同期于内蒙古医科大学附属医院体检中心收集年龄组成、性别组成与病例组结构相同的健康人20名做为对照组研究对象。收集此60名研究对象的空腹静脉血,采用Q-PCR(Quantitative real time polymerase chain reaction,实时荧光定量聚合酶链式反应)对全血中NLRC4、nlrp12、Caspase-1、ASC蛋白进行m RNA水平的相对表达量测定,分离血清后采用ELISA(enzyme linked immunosorbent assay,酶联免疫吸附测定法)测定上述蛋白下游炎症细胞因子白介素1β(IL-1β)、白介素18(IL-18)、干扰素γ(IFN-γ)的表达量。应用SPSS 22.0统计学软件分析所有数据,分析上述各蛋白m RNA表达水平的差异、各蛋白基因表达水平与炎症细胞因子表达水平的相关性。结果:(1)Caspase-1在对照组中表达水平为1.00(1.00,1.00),在急性期病例组表达水平为1.32(0.81,1.66),在慢性期病例组中表达水平为1.60(1.17,2.64),经统计学检验,慢性期病例组较急性期病例组、对照组表达水平均为高(P0.05),该蛋白的m RNA在急性期病例组中表达水平较对照组有上升趋势;ASC在对照组中表达水平为1.00(1.00,1.00),在急性期病例组表达水平为0.86(0.55,1.09),在慢性期病例组中表达水平为0.89(0.52,1.26),经统计学检验,急性期病例组表达水平低于对照组(P0.05),慢性期病例组中表达水平较急性期病例组有升高趋势;NLRC4在对照组中表达水平为1.01(1.00,1.02),在急性期病例组表达水平为0.89(0.58,1.58),在慢性期病例组中表达水平为0.93(0.44,1.38),经统计学检验,三组研究对象之间表达水平无明显差异(P>0.05);nlrp12在对照组中表达水平为1.01(1.00,1.01),在急性期病例组表达水平为2.95(0.70,4.28),在慢性期病例组中表达水平为1.48(1.03,3.10),经统计学检验,急性期病例组中表达水平明显高于对照组(P0.05),慢性期病例组该蛋白的m RNA表达水平较急性期病例组有下降趋势。(2)炎症细胞因子IL-1β在对照组表达水平为1.03(0.35,2.83),在急性期病例组表达水平为7.05(0.56,7.57),在慢性期表达水平为1.47(0.29,6.33),经统计学检验,三组间表达无差异(P>0.05),急性期病例组与慢性期病例组表达均有上升趋势;IL-18在对照组表达水平为1333.25(1063.73,1889.29),在急性期病例组表达水平为2665.81(1446.15,6038.80),在慢性期表达水平为1066.90(787.20,1656.71),经统计学检验,急性期表达水平高于慢性期病例组和对照组(P0.05),慢性期病例组与急性期病例组比较表达趋势下降,与对照组表达趋势持平;IFN-γ在对照组表达水平为0.00,在急性期病例组表达水平为4.39(0.00,17.35),在慢性期表达水平为0.14(0.00,1.18),经统计学检验,急性期病例组中表达水平高于慢性期病例组、对照组,慢性期病例组表

关键词：布鲁氏菌病炎症小体 Caspase-1 NLRC4 nlrp12 炎性细胞因子