腺苷受体A2B通过调节cAMP水平和NF-κB通路介导酒精相关性肝炎

作     者：赵宁 

作者单位：安徽医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：吕雄文

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：腺苷受体A2B 环磷腺苷 枯否细胞 NF-κB 酒精性肝炎 

摘      要：背景:酒精滥用导致的酒精性肝病(Alcoholic Liver Disease ALD)是发病率和死亡率最高的疾病之一。巨噬细胞与肝细胞在ALD相关的炎症与肝损伤中发挥着关键作用。在酒精代谢的作用下,NF-κB信号通路等炎症通路被激活,肝细胞受损死亡释放大量的趋化因子与炎症介质,Kupffer细胞(KCS)(肝脏常驻巨噬细胞)以及其它募集到肝脏的巨噬细胞激活释放大量促炎性细胞因子,这些炎症介质协同促进ALD进展。A2B受体(A2BAR)是腺苷受体家族的一员,属于G蛋白偶联受体,具有七个跨膜(TM 1-7)结构域,亲和力低,是良好的药理学靶点。大量的研究证明,缺氧、损伤、炎症等病理状态下A2BAR的表达会急剧升高同时多种巨噬细胞上也观测到A2BAR的大量表达。另外人类启动子上NF-κB的推定位点与A2BAR密切相关。我们旨在探究A2BAR在酒精性肝炎中的作用和分子机制。目的:(1)探究A2BAR在酒精性肝炎中的作用;(2)探究A2BAR在酒精性肝炎中的分子机制;方法:建立小鼠酒精性肝炎模型,随机将实验动物分为对照液体饲料组(Pairfed)、酒精液体饲料组(Et OH-fed)、对照液体饲料+BAY606583(A2BAR特异性激动剂,5mg/kg)、酒精液体饲料组+BAY606583(A2BAR特异性激动剂,5mg/kg)。使用HE以及BODIPY染色技术以检测肝损伤和脂质累积情况。借助Western blot和(或)RT-q PCR和(或)ELISA实验以检测A2BAR,c AMP,IL-1β,IL-6和TNF-ɑ的表达。体外实验采用酒精(100 m M)刺激RAW264.7细胞从而构建体外炎症模型。分别采用质粒以及小干扰RNA处理酒精刺激后RAW264.7细胞。借助Western blot和(或)RT-q PCR和(或)ELISA实验以检测A2BAR,c AMP,TNF-ɑ,IL-1β和IL-6的表达。结果:动物实验中,与Et OH-fed组相比,Et OH-fed+BAY606583组(A2BAR特异性激动剂)血清学指标ALT,AST,TC,TG和IL-1β,IL-6,TNF-α均有所降低同时c AMP水平升高。病理切片结果显示Et OH-fed+BAY606583组中的肝脏因酒精引起的脂肪空泡明显减少同时炎性细胞浸润也明显减少。动物实验结果显示激动A2BAR可以上调c AMP水平以减轻酒精性肝炎。体外实验中,酒精刺激RAW264.7细胞后会上调A2BAR的表达,降低c AMP的水平同时也上调细胞上清液中IL-1β,IL-6,TNF-α的含量。过表达A2BAR干预处理酒精刺激的RAW264.7细胞后会降低细胞上清液中IL-1β,IL-6,TNF-α的含量,升高胞内c AMP水平同时影响NF-κB通路关键蛋白。A2B-si RNA处理酒精刺激的RAW264.7细胞后会升高细胞上清液中IL-1β,IL-6,TNF-α的含量,降低胞内c AMP水平同时影响NF-κB通路关键蛋白。实验结果显示激动A2BAR抑制了巨噬细胞的激活从而减轻酒精诱导的炎症反应。结论:(1)激动A2BAR可以减轻酒精性肝炎;(2)激动A2BAR可以升高因酒精刺激降低的c AMP水平减轻酒精诱导的炎症反应;(3)过表达A2BAR能够抑制ETOH诱导的RAW264.7细胞的炎症反应;沉默A2BAR则会加剧ETOH诱导的RAW264.7细胞的炎症反应;(4)在体外ETOH诱导的RAW264.7细胞中,A2BAR与c AMP和NF-κB信号通路密切相关。