背根神经节Cbl-b介导的TrkA的泛素化在抑制骨关节炎性痛中的作用

作     者：陈海坤 

作者单位：兰州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：胡晓东

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

主      题：TrkA Cbl-b 泛素化 骨关节炎性痛 

摘      要：目的:TrkA（Tropomyosin-related kinase A）表达于背根神经节（Dorsal root ganglia,DRG）的肽能和非肽能伤害感受器中,参与调节骨关节炎（Osteoarthritis）诱发的病理性疼痛。Casitas B淋巴瘤-b（Casitas B-lineage lymphoma-b,Cbl-b）作为E3泛素连接酶,能够泛素化TrkA。本研究旨在探讨Cbl-b介导的TrkA泛素化在骨关节炎性痛中的作用。方法:我们应用免疫组织化学染色,研究Cbl-b在小鼠DRG中的分布情况;制备内侧半月板-胫骨韧带切断（Destabilization of the medial meniscus,DMM）模型;利用免疫共沉淀及免疫印迹法,探讨Cbl-b对TrkA的泛素化及其表达的影响;运用行为学测试,评估Cbl-b介导的TrkA泛素化对小鼠痛行为的影响。结果:（1）在DMM模型小鼠的DRG中,TrkA的Lys48多聚泛素化水平明显降低,TrkA的蛋白表达显著升高,但TrkA的Lys63多聚泛素化水平无明显变化;（2）在DMM模型小鼠的DRG中,Cbl-b与TrkA结合明显减少,但c-Cbl与TrkA的结合无显著变化;（3）Cbl-b与TrkA共分布于DRG的有髓伤害感受器、无髓肽能及非肽能伤害感受器中;（4）我们利用shRNA（shRNA-Cbl-b）,敲低正常小鼠DRG中的Cbl-b,发现:shRNA-Cbl-b能够降低TrkA的泛素化水平;（5）行为学检测结果表明:shRNA-Cbl-b可以诱发正常小鼠的机械性痛觉超敏、机械性痛觉过敏和热痛觉过敏,而不引起冷痛觉超敏;注射特异性TrkA抗体,可显著缓解shRNA-Cbl-b诱发的痛敏症状;（6）在正常小鼠的DRG中,过表达活化态的Cbl-b,会促进TrkA泛素化,但不影响小鼠的痛阈;（7）在DMM模型小鼠的DRG中,过表达活化态的Cbl-b,能够提高TrkA的Lys48多聚泛素化水平,降低TrkA的蛋白表达,缓解机械性痛觉超敏、机械性痛觉过敏和热痛觉过敏;（8）在DMM模型小鼠的膝关节内,过表达活化态的Cbl-b,也可以抑制骨关节炎性痛症状。结论:干预Cbl-b对TrkA的泛素化修饰,可有效缓解骨关节炎性痛。