碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的药敏试验及其常见耐药基因筛查

作     者：张余彬 

作者单位：福建医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：杨滨

授予年度：2020年

学科分类：1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

主      题：碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌 替加环素 耐药基因 体外联合药敏 血流感染 

摘      要：目的评价替加环素(TGC)单药以及替加环素联合阿米卡星(AK)、替加环素联合多粘菌素B(PB)对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的体外抗菌活性;调查相关耐药基因的流行分布;探讨复敏液对纸片法检测替加环素药敏试验的影响。分析4例CRKP血流感染不同抗感染方案的疗效及体外药敏试验,为临床治疗碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌提供参考。方法1.收集本院2018年2月至2018年10月临床科室分离的非重复CRKP菌株共71株。采用VITEK 2 Compact仪器法检测GN-09药敏卡含有的抗菌药物的体外药敏试验;采用纸片法检测替加环素和阿米卡星的体外药敏试验;采用微量肉汤稀释法检测替加环素单药、替加环素联合阿米卡星和替加环素联合多粘菌素B的MIC值,通过棋盘格联合药敏试验设计不同浓度的药敏组合并计算部分抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration index,FICI);探讨滴加复敏液纸片法检测替加环素结果的可靠性。以PCR方法筛查CRKP中替加环素、阿米卡星和多粘菌素B的常见相关耐药基因携带情况(包括tet(A)、tet(X)、rmt A、rmt B、arm A、aac(3)-I、aac(3)-II、aac(6?)-Ib、ant(3??)-Ia、MCR-1基因),部分测序结果在Gene Bank数据库中通过BLAST比对以确定耐药基因。2.收集本院2019年2月至2020年3月临床血液感染分离的CRKP菌株共4株及其临床资料。采用VITEK 2 Compact仪器法检测常见抗菌药物的MIC值(同第一部分);采用棋盘格联合药敏试验检测替加环素、多粘菌素B和替加环素联合多粘菌素B的MIC值,并计算FIC指数。以PCR方法筛查替加环素和多粘菌素B的常见相关耐药基因携带情况(同第一部分)。结合临床病例分析联合抗感染方案与炎症指标、体外药敏试验之间的关联。结果*** 2 Compact仪器法结果显示CRKP对头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟、氨苄西林/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦耐药率均为100%(71/71),对亚胺培南和美罗培南耐药率均为98.6%(70/71),对环丙沙星和左氧氟沙星耐药率均为93.0%(66/71),对氨曲南、阿米卡星耐药率分别为97.2%(69/71)和87.3%(62/71)。纸片法结果显示CRKP对阿米卡星、替加环素的耐药率分别为76.1%(54/71)、5.6%(4/71);微量肉汤稀释法结果显示CRKP对阿米卡星、替加环素和多粘菌素B的耐药率分别为85.9%(61/71)、7.0%(5/71)、4.2%(3/71);当替加环素与阿米卡星联合作用后,棋盘格联合药敏试验结果表现为协同作用、相加作用、无关作用、拮抗作用分别为8.5%(6/71)、15.5%(11/71)、70.4%(50/71)和5.6%(4/71)。当替加环素与多粘菌素B联合作用后,棋盘格联合药敏试验结果表现为协同作用、相加作用和无关作用分别为4.2%(3/71)、78.9%(56/71)和16.9%(12/71),无拮抗作用。方法学评价:微量肉汤稀释法和VITEK 2 Compact仪器法检测CRKP对阿米卡星的敏感性相一致(?0.99),纸片法检测结果与前两种方法的差异均具有统计学意义(?=13.56,P0.01;?=10.33,P0.01);微量肉汤稀释法和纸片法检测替加环素敏感性的差异具有统计学意义(?=34.33,P0.01)。当替加环素与阿米卡星联合作用后,联合药敏结果显示两药的MIC值均下降,替加环素与单药作用的MIC值相比,差异具有统计学意义(t=2.39,P0.05);联合药敏中阿米卡星MIC值与单药作用的相比下降更明显,差异具有统计学意义(t=16.61,P0.01)。滴加复敏液后,替加环素的敏感率(97.2%)均显著高于滴加复敏液前的66.2%(?=8.90,P0.01)和微量肉汤稀释法的77.5%(?=11.22,P0.01)。PCR扩增71株CRKP中共23株携带氨基糖苷类耐药基因,携带单个耐药基因的有:rmt B基因、aac(3)-I基因、aac(3)-II基因和aac(6?)-Ib基因携带率分别为9.9%(7/71)、2.8%(2/71)、4.2%(3/71)和14.1%(10/71);同时携带两种耐药基因的有:rmt B基因和aac(6?)-Ib基因携带率为1.4%(1/71);未检测出rmt A耐药基因、arm A耐药基因和ant(3??)-Ia耐药基因。对替加环素进行耐药基因检测发现:外排泵tet(A)基因携带率为81.7%(58/71),其中同时携带两种耐药基因的有:tet(A)基因和rmt B基因、tet(A)基因和aac(6?)-Ib