植物乳杆菌AJG1-4对耐药性弗氏柠檬酸杆菌的抑制作用研究

作     者：刘佳伊 

作者单位：渤海大学 

学位级别：硕士

导师姓名：白凤翎;季广仁

授予年度：2020年

学科分类：0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 08[工学] 083204[工学-水产品加工及贮藏工程] 

主      题：植物乳杆菌 耐药性弗氏柠檬酸杆菌 筛选 抑菌作用 

摘      要：近年来,人类将抗生素大量应用于水产养殖中,导致细菌耐药性的产生和药物在鱼体和环境中的残留,进而对人类健康造成威胁。耐药菌的危害十分严重,它不仅直接影响动物产品的安全与卫生,耐药性细菌还会通过食物链向人体转移继而将耐药基因扩散于正常菌群,导致人体病原菌对常用抗菌药物产生耐药性,因此对细菌耐药性问题必须引起高度重视。本文应用植物乳杆菌AJG1-4为目标菌,耐药性弗氏柠檬酸杆菌（Citrobacter freundii）为应试菌。从细胞膜通透性、紫外吸收物质、细胞形态特征和蛋白质合成等指标初步探究植物乳杆菌AJG1-4对耐药性***的抑菌机理,并将其应用于大菱鲆鱼肉中耐药性***的控制,为控制水产品中耐药菌问题提供理论基础。主要研究结果结果如下:1.从安徽绩溪高笋和酸黄瓜、东北酸菜等传统发酵食品中分离的80株乳酸菌中筛选出6株对耐药性弗氏柠檬酸杆菌具有抑菌活性的乳酸菌,经生理生化和分子生物学鉴定,菌株AJG1-4、DLL-500、LJM1-4、ZHG2-1是植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,菌株DLH-12、STM1-2是清酒乳杆菌（Lactobacillus sake）。2.从6株乳酸菌中复筛获得对耐药性弗氏柠檬酸杆菌抑制作用较强的菌株AJG1-4,抑菌直径为20.12±0.75 mm。其无细胞上清液经p H、蛋白酶以及热处理试验分析,初步判定乳酸菌无细胞上清液（cell-free supernatant,CFS）AJG1-4粗提物中的抑菌活性物质为细菌素类。3.应用菌株AJG1-4对耐药性***菌体进行机理的初步研究,结果表明菌株AJG1-4无细胞上清液改变了耐药性***细胞膜的通透性,导致菌液的电导率明显增加,蛋白质泄露以及核酸物质大量流出;且经菌株AJG1-4处理过的耐药性***,菌体细胞膜出现褶皱,并有溶解现象,细胞完整性完全丧失,细胞整体结构坍塌。4.应用菌株AJG1-4粗提物、菌株AJG1-4粗提物和头孢他啶对大菱鲆鱼肉中耐药性***抑制作用进行初步研究,分析得到:经菌株AJG1-4粗提物、菌株AJG1-4粗提物和头孢他啶共同处理后的大菱鲆鱼肉的实验组感官分值较高,说明其可有效控制细菌的生长繁殖,抑制大菱鲆鱼肉中耐药性***数量的增长,有效延缓大菱鲆鱼肉中p H、TVB-N的上升,且菌株AJG1-4粗提物和头孢他啶共同处理后对大菱鲆鱼肉的抗菌效果最佳。结果表明添加菌株AJG1-4粗提物可有效控制大菱鲆鱼肉中耐药性***的生长繁殖,且菌株AJG1-4粗提物与头孢他啶共同处理能有效延长大菱鲆鱼肉货架期至少2d。表明菌株AJG1-4粗提物可提高头孢他啶对耐药性***的敏感性。