抑制mTOR通路促进衰老牙龈年轻化的体外研究

作     者：夏一如 

作者单位：上海交通大学 

学位级别：硕士

导师姓名：束蓉

授予年度：2017年

学科分类：1003[医学-口腔医学] 100302[医学-口腔临床医学] 10[医学] 

主      题：人牙龈成纤维细胞 细胞衰老 雷帕霉素 细胞增殖 氧化应激 炎症反应 

摘      要：目的:探讨抑制mTOR通路对衰老的人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast,hGFs)增殖能力、氧化应激及炎症反应的影响。方法:通过传代培养构建hGFs复制性衰老模型,计算累积细胞群体倍增指数(cumulative population doublings,CPD)并绘制生长曲线;采用浓度为20 nmol/L的雷帕霉素作用于hGFs,观察mTOR通路中S6蛋白磷酸化情况以及对hGFs增殖、凋亡及细胞周期变化;以20nmol/L雷帕霉素对CPD≥40的高代数hGFs分别短期(3天)及长期(30天)刺激为实验组,对照组仅为DMSO刺激,检测衰老相关指标β-半乳糖苷酶染色、Ki-67染色、p16,p21蛋白的表达情况以及细胞因子白介素6和白介素8的分泌情况,并检测细胞内活性氧簇水平,以及抗氧化应激酶的表达变化;采用MOI=10牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,***)标准株分别刺激实验组及对照组2、24 h,检测炎症因子的表达情况,细胞内氧化应激水平。采用SPSS 22.0软件对所得数据进行统计学分析,检验水平为α=0.05。结果:hGFs生长曲线近似“S形,其最大CPD值为70;20 nmol/L的雷帕霉素完全抑制S6蛋白的磷酸化,对hGFs的增殖、凋亡及细胞周期无显著影响(p0.05);短期及长期应用20 nmol/L雷帕霉素,高代数hGFs衰老相关指标表达下降,保存其增殖能力,抗氧化应激能力增强,下调炎症因子分泌(p0.05)。结论:抑制mTOR通路可保存衰老的hGFs增殖能力,延缓细胞衰老,缓解氧化应激反应,并提高抵抗炎症反应的能力。