游离血栓调节蛋白在脓毒症毛细血管渗漏中的作用研究

作     者：李莉 

作者单位：上海交通大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王海嵘

授予年度：2017年

学科分类：100218[医学-急诊医学] 1002[医学-临床医学] 10[医学] 

主      题：脓毒症 血栓调节蛋白 毛细血管渗漏 单层内皮细胞 通透性 

摘      要：脓毒症是烧伤、创伤、严重感染等疾病的常见并发症,继而可能导致弥漫性血管内凝血、休克甚至多器官功能不全等,是危重病患者死亡的主要原因之一。血栓调节蛋白(Thrombomodulin,TM),是主要表达于内皮细胞表面的单链跨膜糖蛋白,可在炎症因子等刺激下被酶解,形成大小不一的可溶性片段即游离血栓调节蛋白游离进入血液。有文献报道,在脓毒症或创伤所致的多器官功能障碍的病人血液中游离血栓调节蛋白水平明显高于健康人的水平。内皮细胞通透性增高所致血管渗漏可能是脓毒症发生发展过程中一个重要的环节,并对病情进展起到关键性的影响。本研究中,为了探索游离血栓调节蛋白在脓毒症血管渗漏中的作用,并具体到其中游离的表皮生长因子样结构功能域(TM-D2)对内皮通透性的影响,进行了相关的ELISA检测,单层内皮模型构建,通透性比较,细胞活性检测,质粒构建,重组蛋白表达和纯化,取得了以下研究成果:1.弹性蛋白酶作用下,内皮细胞表面血栓调节蛋白的游离明显增加。2.含有游离血栓调节蛋白的细胞上清液可以改善单层内皮细胞模型对于大分子的通透性,而且抗血栓调节蛋白EGF-2区段的抗体可以部分阻断此种保护作用。3.成功得到整合有rTM-D2重组质粒的菌株,诱导表达后纯化获得了重组蛋白rTM-D2。