BML-111通过负性调节缺氧诱导因子1α及5-脂加氧酶抑制宫颈癌Hela细胞的迁移及机制研究

作     者：徐静 

作者单位：南昌大学 

学位级别：硕士

导师姓名：汪庆余;郝华

授予年度：2020年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：宫颈癌 BML-111 HIF-1α 5-LOX 迁移 

摘      要：目的:宫颈癌是全球女性最常见的妇科恶性肿瘤之一,严重威胁着世界各地女性的健康。既往研究显示脂氧素A4(Lipoxin A4,LXA4)在多种炎症相关肿瘤的发生发展过程中起着重要作用,由此我们推想脂氧素类似物BML-111是否能通过调节缺氧诱导因子1α及5-脂加氧酶影响宫颈癌细胞的迁移能力,并在此基础上,探讨其相关的作用机制,为宫颈癌寻找新的治疗方法提供实验依据。方法:1、应用免疫组织化学法检测缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)和5-脂加氧酶(5-lipoxygenase,5-LOX)在42例宫颈癌(鳞状细胞癌36例,腺癌6例)组织和20例慢性宫颈炎组织中的表达情况,并以CD68标记巨噬细胞、CD31标记血管检测两种组织中巨噬细胞的数量和微血管的密度。2、通过MTT法检测BML-111对CoCl诱导的Hela细胞存活率的影响。3、通过划痕实验和Transwell实验,检测BML-111对CoCl诱导的Hela细胞迁移产生的影响。4、通过免疫荧光实验观察BML-111对Hela细胞HIF-1α表达产生的影响及HIF-1α在细胞内的定位。5、通过蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测BML-111对CoCl诱导后细胞HIF-1α、5-LOX、MMP2及MMP9蛋白表达的影响。结果:1、IHC结果显示,HIF-1α在宫颈癌组织中的阳性表达率为71.43%(30/42),在慢性宫颈炎组织中的阳性表达率为0%(0/20);5-LOX在宫颈癌组织中的阳性表达率为78.57%(33/42),在慢性宫颈炎组织中的阳性表达率为40%(8/20);CD68在宫颈癌组织中的阳性表达率为71.43%(30/42),在慢性宫颈炎组织中的阳性表达率为15%(3/20);HIF-1α、5-LOX、CD68在慢性宫颈炎组织中的表达均低于宫颈癌组织(P0.01)。宫颈癌组织中的微血管数43.111±10.3230明显高于慢性宫颈炎组织8.500±1.7795(P0.01)。2、MTT结果:BML-111对CoCl诱导的Hela细胞的增殖具有明显的抑制作用(P0.05)。3、划痕实验和Transwell实验结果:BML-111对CoCl诱导的Hela细胞迁移能力影响结果如下:CoCl组相比于对照组,Hela细胞的迁移能力显著增强(P0.01);CoCl+BML-111组相比于CoCl组,Hela细胞的迁移能力显著减弱(P0.01);CoCl+BML-111+Boc-2组相比于CoCl+BML-111组,Hela细胞的迁移能力显著增强(P0.01)。4、免疫荧光实验结果:HIF-1α主要定位在细胞核和细胞浆中表达,相比于对照组,CoCl组的HIF-1α的表达明显增强,BML-111作用后,HIF-1α的表达减弱,若加入Boc-2预处理,BML-111的抑制作用消失(P0.01)。5、蛋白免疫印迹实验结果:CoCl组相对于空白对照组,Hela细胞中HIF-1α、5-LOX、MMP2、和MMP9蛋白表达均增高(P0.05),CoCl+BML-111组相对于CoCl组,HIF-1α、5-LOX、MMP2、和MMP9蛋白表达均降低(P0.05),CoCl+BML-111+Boc-2组相对于CoCl+BML-111组,HIF-1α、5-LOX、MMP2、和MMP9蛋白表达均增高(P0.05)。结论:1、BML-111能抑制CoCl诱导的Hela细胞的迁移能力。2、BML-111能通过负性调节HIF-1α和5-LOX抑制宫颈癌Hela细胞的迁移能力。