Z-DEVD-fmk减轻红细胞储存损伤的应用研究

作     者：贾豫 

作者单位：遵义医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王海英

授予年度：2021年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100215[医学-康复医学与理疗学] 10[医学] 

主      题：储存红细胞 储存损伤 抗衰老 Caspase-3抑制剂 

摘      要：目的:观察半胱天冬氨酸酶-3(cysteine-containing aspartate-specific protease,Caspase-3)抑制剂(Z-DEVD-fmk)抑制储存红细胞(red blood cells of stroge,sRBC)内 Caspase-3活性,减轻sRBC的储存损伤。方法:1.取新鲜的sRBC,将其分为6组:生理盐水组(A组)、10μmol/LZ-DEVD-fmk抑制剂组(B 组)、30μmol/L Z-DEVD-fmk 抑制剂组(C 组)、50μmol/L Z-DEVD-fmk抑制剂组(D组)、100μmol/LZ-DEVD-fmk抑制剂组(E组)、DMSO组(F组)。A组加入0.9%的生理盐水(normal saline,NS)100μl;B组、C组、D组、E组中分别加入不同浓度的Z-DEVD-fmk 100μl,将各组样本轻轻混匀,使药物均匀分配,其终浓度分别为10、30、50、100μmol/L;F组则加入等量的二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)100μl。置于(4±2)℃冰箱中储存。2.记录和检测指标:2.1渗透压:分别于加药后的第1、21天测量红细胞外渗透压。2.2 sRBC内的丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量:分别于加药后的第1、7、14、21天通过硫代巴比妥酸比色法检测sRBC内MDA含量。2.3 sRBC 内的 Caspase-3 活性和三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量:分别于加药后的第1、7、14、21天通过ELISA法检测sRBC内的Casapse-3活性、ATP含量。2.4 sRBC膜上的磷脂酰丝氨酸(phosphatidyl serine,PS)暴露率:分别于加药后第1、7、14、21天通过流式细胞仪检测sRBC膜上PS的暴露率。结果:1.红细胞外渗透压:各组加药后的第1、21天红细胞外渗透压均在正常渗透压范围。2.sRBC内的MDA含量:在给药后的第1、7、14、21天,随着储存时间的延长,各组sRBC内的MDA含量不断累积,MDA含量在各组组内不同时间点比较具有差异(P0.05);与E组比较,B、C组sRBC内的MDA含量水平低于E组(P0.05);与E组比较,B、C组sRBC内的Caspase-3活性低于E组(P0.05);与E组比较,B、C组sRBC内的ATP含量高于E组(P0.05);与E组比较,B、C组sRBC膜上PS的暴露率低于E组(P0.05)。结论:1.储存红细胞随着储存时间的延长,其抗氧化应激能力减弱,Caspase-3活性增加,进一步损伤储存红细胞。2.应用Z-DEVD-fmk抑制Caspase-3活性,可有效减轻储存红细胞的储存损伤,本实验中,适宜浓度的范围是10-30μmol/L。3.储存红细胞的损伤机制可能与Caspase-3介导的凋亡增加有关,Z-DEVD-fmk具备一定保护作用。