马钱子碱干预Heymann肾炎大鼠及其对足细胞Nephrin、Podocin的作用研究

作     者：余杭英 

作者单位：浙江中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：朱彩凤

授予年度：2016年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：马钱子碱 Heymann肾炎 足细胞分子 Nephrin Podocin 

摘      要：目的通过研究马钱子碱对被动型Heymann肾炎(PHN)大鼠的足细胞分子Nephrin、Podocin表达的影响,探讨马钱子碱对膜性肾病(MN)大鼠模型的作用及机制。方法选取SD雄性大鼠116只,适应性喂养1周后,随机分为7组,即正常对照组、马钱子碱A组、马钱子碱B组、马钱子碱C组、马钱子碱D组、雷米普利组、模型对照组。造模后第9天开始,马钱子碱A、B、C、D组每日上午按5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、30mg/kg腹腔注射马钱子碱溶液。雷米普利组每日按5mg/kg雷米普利混悬液灌胃。模型对照组和正常对照组按雷米普利组等体积生理盐水灌胃。实验期间,动物自由饮食饮水。给药第7天、14天,每组分别处死5只大鼠,给药第21天处死余下大鼠,测定24小时尿蛋白定量及血常规、血生化指标;留取肾组织标本,行免疫荧光IgG、免疫组化检测足细胞Nephrin、Podocin蛋白。结果 1.大鼠血液、尿液指标的变化:(1)24小时尿蛋白定量水平:给药第7天、给药第14天和给药第21天,与空白组比较,其余各组24小时蛋白定量明显高于空白组,差异有统计学意义(P0.05),但各马钱子碱干预组较雷米普利组与模型组均有所下降。给药第14天,与模型组比较,马钱子碱C组、D组24小时蛋白定量低于模型组,且差异有统计学意义(P0.05);给药第21天,与模型组比较,实验各组24小时蛋白定量低于模型组,有显著性差异(P0.05),在马钱子碱为30mg/kg时下降最多。(2)血清白蛋白水平:给药第7天、第14天和给药第21天,与空白组比较,其余各组血清白蛋白水平明显低于空白组,差异有统计学意义(P0.05);给药第14天,与模型组比较,马钱子碱C组、D组血清白蛋白水平高于模型组,差异有统计学意义(P0.05);给药第21天,与模型组比较,马钱子碱各组血清白蛋白水平高于模型组,有显著性差异(P0.05);与雷米普利组比较,马钱子碱各组血清白蛋白水平与雷米普利有显著性差异(P0.05),但马钱子碱各组随着浓度的上升,其血清白蛋白水平有增加的趋势,在马钱子碱为30mg/kg时增加最多。(3)血清肌酐、谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平,血白细胞水平:给药第7天、14天、21天,各组之间无统计学差异(P0.05)。2.大鼠肾脏病理形态学改变:(1)大鼠肾脏免疫荧光IgG的沉积:给药第7天,实验各组之间没有统计学差异(P0.05);给药第14天,与模型组比较,马钱子碱C组、D组与模型组有显著差异(P0.05),与雷米普利组比较,马钱子碱C组、D组与雷米普利组有显著差异(P0.05);给药第21天,与模型组比较,实验各组免疫荧光IgG阳性区平均积分光密度低于模型组,差异有统计学意义(P0.05),但马钱子碱各组随着浓度的上升,其免疫荧光IgG阳性区平均积分光密度有下降的趋势。(2)大鼠肾脏免疫足细胞分子Nephrin、Podocin的沉积:给药第7天、第14天、第21天,各实验组和模型组大鼠足细胞分子Nephrin、Podocin的表达均低于空白组,有统计学意义(P0.05);给药第14天,与模型组比较,马钱子碱C组Podocin的表达显著升高(P0.05);给药第21天,与模型组比较,实验各组大鼠足细胞分子Nephrin、Podocin的表达显著升高(足细胞分子Nephrin的表达除马钱子碱A组外)(P0.05),且马钱子碱各组随着浓度的上升,其大鼠足细胞分Nephrin、Podocin的表达有增加的趋势,在马钱子碱为30mg/kg时增加最多。结论(1)马钱子碱可以减少PHN大鼠的尿蛋白排泄定量,可能提高PHN大鼠血浆白蛋白水平;(2)马钱子碱可以