AlphaB-crystallin促进猪圆环病毒2型复制及其机制研究

作     者：罗荣娣 

作者单位：扬州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：高崧

授予年度：2021年

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：猪圆环病毒2型 PK-15细胞 蛋白质组学 CRYAB 复制 

摘      要：猪圆环病毒2型(porcine circovirustype 2,PCV2)是仔猪断奶后多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原体,对全世界养猪业造成了严重的经济损失。本研究对PCV2感染48 h的PK-15细胞进行无标记的定量蛋白质组质谱(LFQR-MS)分析。组学结果显示,与健康细胞相比,PCV2感染细胞中差异表达的蛋白有1212个,包括796个上调蛋白和416个下调蛋白。基因本体论(Gene ontology,GO)分析表明,这些差异表达的蛋白(differentially expressed proteins,DEPs)与生物过程、细胞成分和分子功能有关,涉及细胞过程、环境信息处理、遗传信息处理、疾病和新陈代谢。京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)途径的富集结果表明,先天免疫应答相关过程明显富集。经过对蛋白组学结果的验证与筛选,选择AlphaB-crystallin(CRYAB)蛋白及其与PCV2复制间的关系进行了深入研究。据报道,CRYAB和细胞质肌动蛋白相互作用,可防止蛋白错误折叠和聚集,有助于维持细胞骨架完整性并促进细胞增殖。迄今,尚无CRYAB对PCV2复制影响的文献报道,本研究有助于揭示宿主对PCV2感染的免疫应答,同时,有利于阐明PCV2在宿主体内的复制与致病机理。我们使用慢病毒包装系统分别构建了 CRYAB在PK-15细胞上过表达和敲低的两种细胞系。将PCV2同时感染CRYAB过表达PK-15细胞和空载对照细胞,病毒滴度、Western blot和荧光定量PCR检测结果均显示过表达CRYAB细胞系中病毒含量高于对照细胞,而CRYAB敲低的PK-15细胞中病毒含量显著低于空载对照细胞。此外,研究发现CRYAB可能通过干预细胞增殖而促进PCV2复制。为了进一步确认细胞增殖是否会影响病毒的复制,使用细胞增殖剂WS3刺激PK-15后感染PCV2,证实WS3促进细胞增殖的同时会促进病毒的增殖。由此推测CRYAB有利于细胞的增殖,从而间接影响病毒的复制水平。