Netrin-1、Slit2在夹脊电针结合神经松动术调节兔坐骨神经损伤后Rho GTPases失衡的作用研究

作     者：赵乐乐 

作者单位：黑龙江中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王艳

授予年度：2021年

学科分类：1005[医学-中医学] 100512[医学-针灸推拿学] 10[医学] 

主      题：坐骨神经 夹脊电针结合神经松动术 Netrin-1 Slit2 Rho GTPases 

摘      要：目的:通过观察夹脊电针结合神经松动术疗法对兔坐骨神经损伤后神经传导速度及Netrin-1、Slit2和Rho GTPases表达的影响,探讨夹脊电针结合神经松动术疗法通过调控Netrin-1、Slit2的表达,抑制Rho GTPases失衡,促进轴突再生的作用机制,为周围神经损伤的临床治疗提供理论支持。方法:新西兰家兔216只,随机分为6组,包括正常对照组、病毒空载组、电针结合神经松动术组、Netrin-1组、Slit2组、Netrin-1+Slit2腺病毒结合组,再按术后1、2、4周三个时间点分为3个亚组,每个亚组12只。钳夹法对兔左侧坐骨神经造成Sunderland Ⅲ度损伤模型。正常对照组按时抓取不做任何处理;各病毒组在模型制备时即完成病毒注射,分别在损伤神经上3mm和下3mm处进行目的病毒注射,每个注射点注射5uL。病毒空载组注射空载病毒;Netrin-1组注射Netrin-1腺病毒(滴度为1.2×108个病毒颗粒·mL-1);Slit2组注射Slit2腺病毒(滴度为1.6×108个病毒颗粒·mL-1);Netrin-1+Slit2腺病毒结合组注射结合腺病毒(滴度同单独病毒注射组)。电针结合神经松动术组:术后第3天进行治疗,先进行夹脊电针治疗,30min/次,1次/天,6天/周;后进行神经松动术治疗,拉长1s,放松5s,10个/组,1组/天,6天/周。各组按相应治疗时间点取材,神经传导速度评定兔神经电生理水平;实时荧光定量PCR、免疫荧光双染检测神经生长导向因子Netrin-1、Slit2表达;Western Blot检测Rho GTPases中三个主要分子Rac1,Cdc42和RhoA蛋白的表达。结果:1.神经电生理评定在1、2、4周各时间点各治疗组神经传导速度均低于正常对照组,差异具有统计学意义(P0.05);Netrin-1组与Slit2组神经传导速度无明显差异(P0.05)。在1周时,病毒空载组神经传导速度高于其他治疗组,差异具有统计学意义(P0.05);Netrin-1组与Netrin-1+Slit2腺病毒结合组Netrin-1 mRNA的表达无明显差异(P0.05)。电针结合神经松动术组Netrin-1 mRNA的表达升高,与Netrin-1组及Netrin-1+Slit2腺病毒结合组的趋向一致,均高于病毒空载组,差异具有统计学意义(P0.05);Slit2组与Netrin-1+Slit2腺病毒结合组Slit2 mRNA的表达无明显差异(P0.05)。电针结合神经松动术组Slit2 mRNA的表达升高,与Slit2组及Netrin-1+Slit2腺病毒结合组的趋向一致,均高于病毒空载组,差异具有统计学意义(P0.05)。坐骨神经中Rac1的表达:在1周时,电针结合神经松动术组Rac1的表达高于Netrin-1+Slit2腺病毒结合组,差异具有统计学意义(P0.05)。L4-L6脊柱节段对应的节段脊髓中Rac1的表达:在1、4周时,电针结合神经松动术组Rac1的表达高于Netrin-1+Slit2腺病毒组,差异具有统计学意义(P0.05);总体趋势上4周组表达效果最佳。5.Cdc42的表达在1、2、4周各时间点,正常对照组坐骨神经及L4-L6脊柱节段对应的节段脊髓中Cdc42的表达高于各治疗组,差异具有统计学意义(P0.05)。坐骨神经中Cdc42的表达:在1周时,电针结合神经松动术组Cdc42的表达高于Netrin-1+Slit2腺病毒结合组,差异具有统计学意义(P0.05)。坐骨神经中RhoA的表达:在1、4周时,Netrin-1+Slit2腺病毒结合组RhoA的表达低于电针结合神经松动术组,差异具有统计学意义(P0.05);在2周时,电针结合神经松动术组RhoA的表达低于Netrin-1+Slit2腺病毒结合组,差异具有统计学意义(P0.05)。L4-L6脊柱节段对应的节段脊髓中RhoA的表达:在1、4周时,Netrin-1+Slit2腺病毒结合组RhoA的表达低于电针结合神经松动术组,差异具有统计学意义(P0.05);在2周时,电针结合神经松动术组RhoA的表达低于Netrin-1+Slit2腺病毒结合组,差异具有统计学意义(P0.05);总体趋势上4周组表达效果最佳。结论:夹脊电针结合神经松动术促进轴突再生的可能机制是通过调节Netrin-1、Slit2的表达,使下游分子Rac1、Cdc42表达上调,RhoA表达下调,调整Rho GTPases酶系统失衡状态,促进细胞骨架重组,促进周围神经损伤后的再生。