丙泊酚对小鼠小脑皮层PF-PC突触传递的影响

作     者：玄芳玲 

作者单位：延边大学 

学位级别：硕士

导师姓名：邱德来

授予年度：2019年

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 100217[医学-麻醉学] 

主      题：丙泊酚 小脑浦肯野细胞 全细胞膜片钳记录 GABABR 平行纤维 蛋白激酶A 

摘      要：[目的]在急性小脑切片上,应用全细胞膜片钳记录技术与药理学方法,在阻断GABAAR(γ-aminobutyric acid Areceptor,GABAAR)与甘氨酸受体(glycine receptor,GlyR)的前提下研究丙泊酚对于离体小鼠小脑皮层平行纤维-浦肯野细胞(Parallel fiber-Purkinje cell PF-PC)的突触传递的影响。[材料与方法]实验动物选用出生后4-7周的ICR小鼠,使用异氟烷吸入麻醉后,迅速断头取脑。随后使用振动切片机制备矢状切片,切片厚度为300 μM。在24-25℃条件下,将小脑切片置于冲95%O2和5%CO2混合气体的人工脑脊液(artificialcerebrospinal fluid,ACSF)中孵育60 min以上。将刺激电极置于分子层,配对刺激平行纤维,其配对刺激脉冲为0.5 Hz(0.2 ms,刺激强度10-100 μA;持续时间50 ms),通过膜片钳放大器(Axopatch-700B)及数据采集软件记录PCs兴奋性突触后电流(excitatory postsynaptic currents,EPSC)。所有实验都给予 picrotoxin(50 μM)与 strychnine(2 μM)阻断GABAAR与GlyR的条件下进行。电生理实验数据分析采用Clampfit 10.3软件,各组数据均用Mean±SEM表示,n代表样本数。数据统计学分析采用SPSS软件,均数的比较采用配单因素方差分析与秩核检验,P0.05被认为有统计学意义。[结果](1)在GABAAR与GlyR在被阻断时,丙泊酚可减少PF-PC兴奋性突触后电流(EPSC)的振幅大小,并显著增加配对脉冲比率(pair-pulsed ratio,PPR)。(2)丙泊酚对PF-PC突触传递的抑制作用是可逆的,并具有浓度依赖性,其半数有效浓度为4.7 μM。(3)N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)的阻断剂 D-氨基膦基戊酸(D-2-Amino-5-phosphonovaleric acid,D-APV)(50 μM)对丙泊酚对PF-PC突触传递的抑制作用无影响。(4)应用 γ-氨基丁酸 B 型受体(γ-aminobutyric acid B receptor,GABABR)的阻断剂saclofen(10 μM)可以完全废除丙泊酚对PF-PC突触的EPSC振幅值的抑制作用与PPR值的增大作用。(5)应用GABABR激动剂baclofen诱发了类似丙泊酚作用的PF-PC突触的EPSC振幅值减小与PPR值增大的现象。在baclofen的存在下,丙泊酚对于PF-PC突触传递无抑制作用。(6)给予蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)抑制剂KT5720也可阻断丙泊酚对PF-PC突触EPSC振幅值的减小效应与PPR值的增大效应。[结论](1)在阻断GABAA和GlyR的条件下,丙泊酚可浓度依赖性地抑制小鼠小脑皮层PF-PC突触传递。(2)丙泊酚对PF-PC突触传递的抑制作用是通过激活突触前GABABR及PKA信号通路来实现的。