双七他克林对慢性高眼压大鼠视神经的保护作用

作     者：刘俊贤 

作者单位：南华大学 

学位级别：硕士

导师姓名：方家华

授予年度：2021年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100212[医学-眼科学] 10[医学] 

主      题：青光眼 慢性高眼压 双七他克林 视神经保护 

摘      要：目的:通过向上巩膜静脉注入高渗氯化钠溶液的方法制作大鼠慢性高眼压模型,检测其视网膜乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,ACh E)表达的变化情况。观察双七他克林是否对大鼠慢性高眼压模型导致的视网膜神经节细胞(Retinal ganglion cell,RGCs)数目和视网膜神经纤维层(Retinal nerve fiber layer,RNFL)厚度的改变具有保护作用。方法:1.将成年健康雄性SD大鼠24只完全随机平均分为4组,分别为:对照组、高眼压1周组(1周组)、高眼压3周组(3周组)、高眼压5周组(5周组)。术前测量所有大鼠基础眼压。对照组双眼不予以任何处理,其余3组大鼠双眼上巩膜静脉均分别被注射50μL1.75mol/L的高渗氯化钠溶液,仅注射一次,术后第1天且随后每隔1天测量其眼压。对照组在测量基础眼压后立即处死,于造模后1周、3周和5周分别处死1周组、3周组和5周组大鼠。摘除双眼并取视网膜制备组织匀浆,采用分光光度计比色法,检测视网膜ACh E的活力。2.将成年健康雄性SD大鼠24只完全随机平均分为4组,分别为:对照组、手术组、双七他克林组以及美金刚胺组。术前测量所有大鼠基础眼压。对照组大鼠右眼行上巩膜静脉穿刺,其余3组大鼠右眼上巩膜静脉均被注射50μL1.75mol/L的高渗氯化钠溶液,仅注射一次。术后每3天测量1次眼压,连续监测一个月。术后对照组和手术组给予正常饮用水,其余两组大鼠饮用水中每天分别加入0.5mg/kg双七他克林和5mg/kg美金刚胺,持续5周。5周后处死所有大鼠,摘除右眼并取视网膜制备冰冻切片,免疫荧光染色法检测大鼠RGCs数目和RNFL厚度的变化。结果:1.1周组、3周组和5周组双眼眼压均值自造模3天后均较造模前高(P0.05)且均高于28mm Hg,可认为慢性高眼压模型制作成功。ACh E在所有大鼠视网膜中均有表达,对照组、1周组、3周组和5周组大鼠视网膜ACh E的活力分别自第0天、7天、21天、35天的时间节点随眼压升高而逐渐增加,1周组、3周组和5周组ACh E活力分别与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);各组大鼠处死前的双眼眼压均值与对应ACh E活力均值的Pearson相关系数为r=0.951,P0.05(双侧),二者具有直线相关关系。2.手术组、双七他克林组和美金刚胺组大鼠自造模3天后右眼眼压均值均高于28mm Hg,且均比左眼眼压(20.34±0.31mm Hg)高5mm Hg以上,可认为模型制作成功。免疫荧光染色结果显示,对照组、手术组、双七他克林组和美金刚胺组大鼠右眼经过视神经的RGCs数目差异有统计学意义(F=24.31,P0.05),手术组RGCs数目明显少于对照组,差异具有统计学意义(P=0.0010.05),双七他克林组和美金刚胺组RGCs数目均少于对照组,但双七他克林组和美金刚胺组分别与对照组的差异均无统计学意义(P=0.106/0.054)。对照组、手术组、双七他克林组和美金刚胺组大鼠右眼距视神经200μm的RNFL厚度差异有统计学意义(F=80.527,P0.05),手术组和美金刚胺组RNFL厚度均明显低于对照组,手术组和美金刚胺组分别与对照组的差异均有统计学意义(P0.05),双七他克林组RNFL厚度略薄于对照组,差异无统计学意义(P=0.063)。结论:1.乙酰胆碱酯酶在正常和慢性高眼压大鼠视网膜中均有表达,在5周内,大鼠视网膜ACh E活力与眼压升高水平具有正向相关关系。2.双七他克林通过抑制慢性高眼压大鼠RGCs数目减少和RNFL变薄,对视神经具有保护作用。