热休克因子1对雨蛙素诱导的小鼠急性胰腺炎的保护作用及对SDF-1/CXCR4表达的影响

作     者：林秋满 

作者单位：南方医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王桂良

授予年度：2021年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：胰腺炎 热休克因子1 基质细胞衍生因子-1 CXC趋化因子受体4 

摘      要：背景目的:热休克因子1（HSF1）对雨蛙素（Caerulein）所致急性胰腺炎小鼠具有保护作用,但对其保护机制尚不清楚;趋化因子基质细胞衍生因子-1（SDF-1）和受体CXC趋化因子受体4（CXCR4）在炎症的发生发展中能造成影响,但对于其在胰腺炎中的表达情况尚且无研究;HSF1对于炎症基因具有调控作用,但尚且无研究关于HSF1对趋化因子SDF-1/CXCR4的调控。本研究以大鼠胰腺外分泌细胞（AR42J）稳定转染ShRNA-HSF1的AR42J细胞、HSF1基因敲除（HSF1-/-）和野生（HSF1+/+）小鼠为研究对象,以雨蛙素制造急性胰腺炎（Acute pancreatitis,AP）模型,探讨HSF1对雨蛙素所致小鼠及AR42J细胞急性胰腺炎的保护作用以及对SDF1/CXCR4表达的影响。方法:1.采用AR42J细胞、建立稳定转染ShRNA-HSF1 AR42J细胞,并且通过雨蛙素处理构建胰腺炎模型;克隆SDF-1基因启动子区的热休克元件（Heat shock element,HSE）序列进行电泳迁移率变动分析（EMSA）,观察HSF1是否与该基因启动子区的HSE结合;通过荧光素酶报告基因检测SDF-1/CXCR4的转录活性;通过RT-PCR分析示SDF-1/CXCR4mRNA表达;ELISA分析SDF-1 蛋白表达;通过Annexin V-FITC染色结合流式细胞术检测细胞凋亡。2.选取成年雄性HSF1-/-小鼠和HSF1+/+鼠各12只（16w,25g左右）,随机分为HSF1+/++NS组、HSF1+/++雨蛙素组、HSF1-/-+NS组以及HSF1-/-+雨蛙素组。通过腹腔注射雨蛙素,以50μg/kg,间隔1小时,持续7小时的方式建立急性胰腺炎模型。对照小鼠接受7次等量生理盐水注射并分别在雨蛙素或者NS处理后24h处死小鼠,取小鼠胰腺组织进行石蜡切片HE染色和病理评分,并收集血清以淀粉-碘比色法检测淀粉酶活性;采用RT-PCR分析SDF-1/CXCR4的mRNA表达水平;用ELISA分析SDF-1蛋白表达;免疫组化检测SDF-1/CXCR4蛋白表达。结果:在AR42J细胞中,EMSA示HSF1能与SDF-1基因启动子区含HSE的序列相结合。荧光素酶报告基因、RT-PCR、ELISA、细胞凋亡检测示未经雨蛙素刺激的转随机序列的AR42J细胞和转ShRNA-HSF1的AR42J细胞中,SDF-1/CXCR4的转录活性及mRNA表达、SDF-1的蛋白表达和细胞凋亡表达均较低且无显著性差异,经雨蛙素处理后,SDF-1/CXCR4的转录活性及mRNA表达、SDF-1蛋白表达和细胞凋亡表达水平上调,抑制HSF1表达能促进SDF-1/CXCR4的转录活性及mRNA表达、SDF-1的蛋白表达和细胞凋亡表达水平上调。在小鼠模型中,经雨蛙素处理后,HE染色和病理评分、胰腺组织病理学评分和血清淀粉酶上调,与HSF1+/+小鼠相比,HSF1-/-小鼠中HE染色和病理评分、胰腺组织病理学评分和血清淀粉酶上调更明显;RT-PCR显示,经雨蛙素处理后,SDF-1和CXCR4的mRNA表达水平上调,HSF1-/-小鼠SDF-1和CXCR4的mRNA表达水平上调更明显;ELISA和免疫组化提示经雨蛙素处理后,SDF-1/CXCR4蛋白表达水平上调,与HSF1+/+小鼠比较,HSF1-/-小鼠的SDF-1/CXCR4蛋白表达水平上调更明显。结论:***1可以抑制雨蛙素所致的AR42J细胞和小鼠胰腺炎的细胞凋亡、胰腺病理损伤作用;2.雨蛙素所致AR42J细胞和小鼠胰腺炎时,SDF-1/CXCR4的表达增加;***1可以从转录水平调控SDF-1/CXCR4,抑制SDF-1/CXCR4的mRNA及蛋白表达。