中药三棱有效成分筛选及其对胃癌MGC-803细胞增殖、凋亡的影响

作     者：唐杰 

作者单位：南华大学 

学位级别：硕士

导师姓名：夏红

授予年度：2021年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：网络药理学 三棱 胃癌 增殖 凋亡 

摘      要：目的研究中药三棱抗胃癌的可能机制,为其临床研究及应用提供理论基础。方法通过网络药理学分析,寻找中药三棱可能抑制胃癌的有效活性成分及分子机制。通过中药三棱5个潜在抗胃癌有效化合物作用胃癌MGC-803细胞,采用MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,RT-q PCR和Western Blot分别检测目标基因m RNA和蛋白表达水平,验证中药三棱有效成分对于胃癌MGC-803细胞增殖、凋亡以及凋亡相关基因及蛋白的影响。结果1.通过网络药理学预测到中药三棱5个潜在抗胃癌有效化合物,包括芒柄花素(formononetin)、豆甾醇(stigmasterol)、β-谷甾醇(beta-sitosterol)、常春藤皂苷元(hederagenin)以及反式-11-二十碳烯酸(transgondoic acid)。2.预测到中药三棱28个与胃癌共同作用的蛋白靶点,主要包括CASP3、ERS1、AR、CASP8、CASP9等。3.预测到中药三棱中可能存在的2条参与抗胃癌作用的主要信号通路,包括凋亡通路、p53通路。4.用MTT法检测细胞增殖,发现中药三棱5个抗胃癌有效成分均可抑制胃癌MGC-803细胞增殖,且抑制作用且呈剂量依赖性关系。同时中药三棱五种有效成分对胃癌MGC-803细胞的24小时IC50分别为:A芒柄花素,IC50 52.94μM/L;B豆甾醇,IC50 50.64μM/L;Cβ-谷甾醇,IC50 29.67μM/L;D常春藤皂苷元,IC50 55.82μM/L;E反式-11-二十碳烯酸,IC50 89.40μM/L;5-FU对胃癌MGC-803细胞的24小时IC50为10.70μM/L。5.采用流式细胞术检测中药三棱五种有效成分作用胃癌MGC-803细胞24h后的凋亡率,发现相对于空白对照组,三棱有效成分均可有效诱导MGC-803细胞凋亡(P0.05)。6.与空白对照组相比,Caspase3及Caspase9基因表达均升高,除反式-11-二十碳烯酸组外Fas、Bax基因表达均升高。另外,Bcl-2基因在芒柄花素、豆甾醇、β-谷甾醇及三棱复合物组表达有降低,在常春藤皂苷元及反式-11-二十碳烯酸组有升高(P0.05)。7.与空白对照组相比,Caspase3及Caspase9蛋白表达均升高,除反式-11-二十碳烯酸组外Fas、Bax蛋白表达均升高。另外,Bcl-2蛋白在芒柄花素、豆甾醇、β-谷甾醇及三棱复合物组表达有降低,在常春藤皂苷元及反式-11-二十碳烯酸组表达有升高(P0.05)。结论三棱有效活性成分包括芒柄花素、豆甾醇、β-谷甾醇、常春藤皂苷元以及反式-11-二十碳烯酸,均可抑制胃癌MGC-803细胞增殖,并可通过细胞凋亡信号通路诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡。