MDM2扩增介导EGFR突变非小细胞肺癌EGFR-TKIs原发耐药作用及机制研究

作     者：孙丹彤 

作者单位：青岛大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张晓春;侯和磊

授予年度：2021年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：EGFR-TKIs MDM2扩增 非小细胞肺癌 原发耐药 

摘      要：肺癌作为一种恶性程度很高的疾病,其发病率与死亡率在中国均高居第一。尤其是中国肺癌患者,仅有不到20%的五年生存率。临床上,我们通常按照肿瘤细胞的病理学差异,将肺癌大致分为小细胞肺癌及非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC),而后者约占所有肺癌病例的85%。随着近年分子检测技术的推进,靶向治疗广泛应用于临床,给携带有如EGFR及ALK等驱动基因突变的NSCLC患者带来了生存获益。但是,在所有携带EGFR敏感突变的NSCLC患者中,有20%-30%的患者表现出对EGFR-TKIs的原发性耐药,从而导致EGFR-TKIs治疗失败,而其机制尚不明确。包括BIM缺失、TP53突变等多个分子机制参与其中。所以,需要对NSCLC患者EGFR-TKIs的原发性耐药机制进一步研究。研究目的临床观察MDM2扩增在NSCLC患者EGFR-TKIs治疗效果,再通过基础实验,明确MDM2扩增及及下游信号通路对NSCLC系EGFR-TKIs治疗敏感性的影响,为进一步探讨EGFR-TKIs原发耐药可能的分子机制提供理论依据。研究方法我们采用新一代测序技术对我中心141例NSCLC患者进行了基因测序,并发现4例患者携带有EGFR敏感突变同时合并MDM2基因扩增。对此4例双突变患者进行随访,明确患者服用一代EGFR-TKIs治疗的有效时间,探究MDM2扩增对EGFR-TKIs治疗的影响。同时,我们采用常规方法进行EGFR突变肺癌细胞系细胞培养和质粒转染,用于构建MDM2过表达NSCLC细胞系及载体对照细胞系。使用MTT法来计算一代EGFR-TKI药物-厄洛替尼对于两组细胞系细胞增殖的抑制率,并计算在细胞系中的药物IC50。另外,通过western blotting技术,对相应蛋白的表达量进行测定。使用富集分析等生信分析方法,预测MDM2介导的相关下游信号通路的改变。研究结果4例携带EGFR敏感突变合并MDM2扩增的NSCLC患者均表现出对EGFR-TKIs的原发耐药,中位无进展生存期为6.3个月(5.1月-8.5月)。而细胞实验表明,上调MDM2蛋白表达可以诱导非小细胞肺癌细胞系对一代EGFR-TKI的耐药。MDM2过表达能够提高对于HCC2279细胞系中厄洛替尼的IC50值[从36.5μM(24.1μM-58.7μM)提高到57.6μM(43.4μM-79.6μM)],并削弱了厄洛替尼对肿瘤细胞增殖的抑制能力。MDM2扩增不会影响EGFR蛋白的表达,但是明显提高了下游ERK1/2蛋白的表达。这种现象提示MDM2扩增会导致EGFR信号通路中下游通路的激活。此外,携带MDM2扩增的NSCLC患者预后不良。NSCLC患者中,MDM2高表达组的无进展生存期(P=0.007)及总生存期(P0.001)均处于劣势。同时,合并有EGFR敏感突变及MDM2扩增的NSCLC患者EGFR-TKIs治疗的无进展生存期较短(P0.001)。生物信息分析显示,ERBB2信号通路可能作为MDM2扩增导致EGFR-TKIs原发耐药的潜在途径,这有待于进一步实验的验证。研究结论***2扩增可能参与携带有EGFR敏感突变的NSCLC患者对一代EGFR-TKIs的原发耐药;***2高表达组NSCLC患者的无病生存期及总生存期较差,提示MDM2与NSCLC患者的不良预后相关;***2扩增及MDM2过表达可以作为NSCLC患者未来治疗的新型生物标志物和治疗靶标。