TMEM16F调控P38/JNK信号通路介导阿尔茨海默病神经元凋亡的作用机制研究

作     者：何佳欢 

作者单位：中国医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：孙晓红

授予年度：2021年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100203[医学-老年医学] 10[医学] 

主      题：阿尔茨海默病 TMEM16F 细胞凋亡 P38 JNK 

摘      要：目的:本研究旨在探讨TMEM16F调控P38/JNK信号通路介导神经元凋亡在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)中的作用机制。研究方法:1、培养人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞,将细胞分为空白对照(Control)组、AD细胞模型(Model)组、si RNA阴性对照(si RNA-NC)组、si RNA-TMEM16F组。2、CCK-8法检测Aβ对SH-SY5Y细胞生存率的影响。3、将SH-SY5Y细胞用si RNA-NC、si RNA-TMEM16F进行转染,Aβ作用24h后收集。4、Western blotting检测沉默TMEM16F后各组细胞TMEM16F,AD病理指标Aβ、P-tau,凋亡相关因子Bcl-2、Bax、caspase-3及P38、JNK的蛋白表达水平。5、Real-Time PCR检测沉默TMEM16F后各组细胞TMEM16F,AD病理指标APP、tau,凋亡相关因子Bcl-2、Bax、caspase-3的m RNA表达水平。6、流式细胞仪检测沉默TMEM16F后细胞凋亡率的改变。7、TUNEL染色法检测沉默TMEM16F后细胞凋亡率的改变。8、JC-1法检测沉默TMEM16F后线粒体膜电位去极化的改变。9、MPTP法检测沉默TMEM16F后线粒体膜通透性转换孔开放的影响。结果:1、Aβ浓度≥20μmol/L,作用时间为24h时,细胞损伤明显,生存率显著下降(P0.01)。2、Aβ处理后,Model组TMEM16F的表达水平明显升高(P0.01)。3、Aβ处理后,Model组AD病理指标APP、Aβ、tau、P-tau表达量显著升高;沉默TMEM16F,APP、Aβ、tau、P-tau表达量显著降低(P0.01)。4、Aβ处理后,Model组凋亡相关指标Bax、caspase-3表达量显著升高,Bcl-2表达量下降;沉默TMEM16F,Bax、caspase-3表达量显著下降,Bcl-2表达量升高(P0.05)。5、Aβ处理后,Model组细胞凋亡率显著上升;沉默TMEM16F,细胞凋亡率显著下降(P0.01)。6、Aβ处理后,Model组线粒体膜电位去极化水平增强;沉默TMEM16F,线粒体膜电位去极化水平下降(P0.01)。7、Aβ处理后,Model组线粒体膜通透性转换孔开放程度增强;沉默TMEM16F,线粒体膜通透性转换孔开放程度下降(P0.01)。8、Aβ处理后,Model组P38、JNK磷酸化水平显著升高;沉默TMEM16F,P38、JNK磷酸化水平显著下降(P0.01)。结论:1、TMEM16F在AD神经元中高表达,沉默TMEM16F对AD神经元具有保护作用。2、沉默TMEM16F使AD神经元凋亡减轻,且Aβ诱导的神经元凋亡的潜在机制可能由线粒体依赖途径介导。3、TMEM16F可能通过激活P38/JNK通路介导AD神经元凋亡。