孕期缺氧在子代大鼠孤独症样行为中的作用研究

作     者：王炜钰 

作者单位：重庆医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：代英

授予年度：2021年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100205[医学-精神病与精神卫生学] 10[医学] 

主      题：孤独症谱系障碍 产前缺氧 缺氧诱导因子-1 突触可塑性 

摘      要：目的:探究大鼠不同程度的孕期缺氧对子代神经系统的损害以及与子代孤独症样行为之间的关系。方法:将孕鼠随机分入对照组(control),丙戊酸阳性对照组(VPA组)和孕期缺氧组(prenatal hypoxia,PH组)。根据缺氧时间和程度,孕期缺氧组又分为PH 1组(孕期第13天时缺氧处理3小时),PH 2组(孕期第13天时缺氧处理6小时),PH 3组(孕期第17天时缺氧处理3小时),PH 4组(孕期第17天时缺氧处理6小时)。缺氧处理结束后正常饲养至子鼠出生。子鼠的行为学分析包括三箱社交实验和旷场实验,子鼠的学习和记忆能力的评估方式为Morris水迷宫实验。实时荧光定量PCR(quantitative real-time reverse transcription PCR,q RT-PCR)检测海马组织中TNF-α的m RNA表达情况,Western blot检测HIF-1α、PTEN、Glu R2、NR2A等蛋白质在海马组织中的表达情况。结果:旷场实验的结果提示VPA组、PH 3组和PH 4组在旷场中的梳毛时间比起control组明显增加(p=0.0271,p=0.0009,p=0.0382),在三箱实验中,VPA组、PH 3组和PH 4组在玩具箱中的时间比control组有显著增加(p=0.0070,p=0.0079,p=0.0064)而在老鼠区域的时间明显减少(p=0.0086,p =0.0075,p =0.0047),而PH 1组和PH 2组则与control组没有显著差异(玩具区域:p =0.8194,p =0.6412,老鼠区域:p=0.7853,p=0.5594)。在水迷宫实验中,各组的子鼠第一天运动距离没有差别,在定位航行训练中,随着训练时间的增加,各组子鼠找到平台的潜伏期都出现缩短,在最后一天撤掉平台之后,除control组外,各组穿越原平台所在区域的次数均有减少,且VPA组、PH 3组和PH 4组的减少与control组相比具有统计学差异(p=0.0323,p=0.0063,p=0.0342)。PCR的结果提示TNF-α在VPA组和PH 4组有显著增加,Western blot结果提示在PH 4组中HIF-1α表达量上调(p=0.0344)而PTEN表达有相应的下调(p=0.0179),突触相关蛋白Glu R2和NR2A在PH 4组中的表达较control组相比均出现了不同程度的升高(p值分别为0.0074和0.0108)。结论:孕鼠晚期缺氧更容易使子代出现孤独症样的行为表现,并且HIF-1α在其中发挥了一定作用,该作用的实现可能是通过突触相关蛋白实现的。