盐酸万古霉素眼用温敏原位凝胶的制备及其在家兔体内的药动学评价

作     者：白露雨 

作者单位：安徽中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：何宁

授予年度：2021年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：盐酸万古霉素 温敏原位凝胶 眼部给药 药动学 全身递送 

摘      要：目的:本文选用盐酸万古霉素作为模型药物,泊洛沙姆407和泊洛沙姆188为温敏材料设计并制备稳定、安全的眼用温敏原位凝胶。通过与滴眼液相比,考察盐酸万古霉素温敏原位凝胶经眼给药后在家兔体内的血药浓度变化,以探讨眼用温敏原位凝胶用于递送盐酸万古霉素治疗眼部疾病的同时发挥全身性疾病治疗作用的可行性,为小分子多肽类药物给药提供新途径。方法:(1)建立盐酸万古霉素体内外分析方法,对高效液相色谱法及液质联用技术进行方法学考察。同时对盐酸万古霉素的油水分配系数、溶解度及稳定性进行测定。(2)盐酸万古霉素眼用温敏原位凝胶的处方筛选及质量评价:以胶凝温度为评价指标,通过单因素实验确定泊洛沙姆407和泊洛沙姆188浓度的考察范围。采用星点设计试验优化处方确定两者的最佳比例,进而制备得到盐酸万古霉素眼用温敏原位凝胶。此外,对盐酸万古霉素眼用温敏原位凝胶的质量、稳定性、释放度、流变学性质、滞留时间及刺激性等进行评价。(3)盐酸万古霉素在家兔体内的药动学实验:以灌胃、耳缘静脉注射为对照组,考察盐酸万古霉素滴眼给药后在家兔血浆中的浓度变化,并计算相关药动学参数,评价小分子多肽类药物经眼吸收入血治疗全身性疾病的可行性。以静脉给药为对照组,比较眼用温敏原位凝胶与滴眼液的主要药动学参数,进一步评价温敏凝胶作为眼用制剂用来提高眼部给药生物利用度的潜力。结果:(1)盐酸万古霉素的体外含量测定方法符合方法学要求。盐酸万古霉素在考察的几种溶液中的溶解度均较大,其中在纯水及生理盐水中的溶解度分别为362.98±1.24 mg/m L、277.75±2.246 mg/m L。而盐酸万古霉素在弱酸性PBS溶液和弱碱性水溶液中的油水分配系数均较小,分别为0.60和0.38,表明盐酸万古霉素的水溶性较好,较难通过生物膜屏障。(2)通过筛选得到盐酸万古霉素眼用温敏凝胶的最佳处方:泊洛沙姆407和泊洛沙姆188的比例为18.88%:0.88%,pH调节剂为2%Tris溶液,0.01%苯扎氯铵作为抑菌剂。温敏凝胶满足在室温下为流动的液体状态,眼部生理环境下为半固体状态。质量评价结果表明,凝胶的pH、黏度、胶凝温度及稳定性均符合眼部用药要求。流变学结果表明,随着剪切速率的增加,温敏凝胶的黏度明显降低,显示出剪切变稀的特性,这有利于凝胶在眼部均匀分布并缓慢溶蚀。而在非生理条件下黏度低便于给药,在生理条件下能够保持黏度大的半固体状态,从而延长药物在眼表的滞留时间。凝胶的体外释放和溶蚀实验结果显示,药物的释放量和凝胶的溶蚀量在12 h均能达到90%以上,两种行为均符合零级动力学过程,且累积释放率和累积溶蚀率之间存在一定的线性关系,表明药物的释放取决于凝胶的溶蚀。此外,温敏凝胶组在眼部的滞留时间(90 min)明显长于滴眼液组(30 min),家兔的眼组织切片及眼部刺激性实验结果显示盐酸万古霉素经眼给药后对兔眼安全、无刺激。(3)采用LC-MS/MS测定家兔血药浓度的标准曲线为:Y=1.2676X+0.0582,R=0.9999,所得准确度、精密度、回收率和稳定性的RSD均小于5%。药动学结果表明盐酸万古霉素经家兔眼部给药后具有较慢的清除率(t:138.5 min),静脉和灌胃给药后的t分别为67.8 min和61.0 min。静脉、眼部和灌胃给药的T分别为5,10和15 min。静脉注射、眼部和灌胃给药后的AUC分别是680.0±46.1,497.1±68.4和67.6±18.6μg/m L·min。眼部给药和口服给药的绝对生物利用度分别为7.3%和1.0%。(4)盐酸万古霉素眼用温敏凝胶与滴眼液的T分别为60 min和10 min,凝胶组的药物在360 min仍可被定量,消除速度明显较慢,说明眼用温敏凝胶具有一定的缓释效果,符合原位凝胶的给药特性。药动学结果显示,凝胶组的C(5.2±0.5μg/m L)是滴眼液C(3.6±0.8μg/m L)的1.44倍,凝胶组的AUC(986.5±43.8μg/m L·min)是滴眼液组(498.8±51.4μg/m L·min)的1.98倍。温敏凝胶和滴眼液的绝对生物利用度分别为14.5%和7.3%,前者是后者的1.98倍。结论:本文以泊洛沙姆407和泊洛沙姆188(18.88%:0.88%)制备得到的盐酸万古霉素眼用温敏原位凝胶在非生理条件下保持流动的液体状态,在生理条件下可转变为半固体的凝胶状态,对眼部安全、无刺激。盐酸万古霉素经眼给药后可进入全身,其各项药动学参数均优于灌胃给药。与滴眼液相比,盐酸万古霉素眼用温敏原位凝胶的AUC显著提高,表明盐酸万古霉素温敏凝胶能够更大程度的吸收入血,进一步提高了药物经眼给药的生物利用度。综上所述,对于口服生物利用度差的小分子多肽类药物,通过眼部给药治疗眼部疾病的同时可应用于全身性疾病的治疗。此外,盐酸万古霉素眼