ATF5和BATF在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及临床意义

作     者：张崇立 

作者单位：郑州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李文才;王冠男

授予年度：2021年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：DLBCL ATF5 BATF 数据库 免疫组织化学 

摘      要：背景和目的非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma,NHL)作为最常见的血液系统恶性肿瘤,一旦确诊会对人类健康产生很大的威胁。弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse Large B-Cell Lymphoma,DLBCL)是最常见的NHL,占NHL的30%-40%,且发病率也呈上升趋势。根据肿瘤细胞起源将DLBCL主要分为两种分子亚型:一种亚型为生发中心B细胞起源DLBCL(germinal center B cell-like DLBCL,GCB型),另一种亚型为活化B细胞样DLBCL(activated B cell-like DLBCL,ABC型),虽然联合CHOP化疗方案可以明显改善患者的预后,但是由于DLBCL疾病本身异质性特征,仍有大约30%-50%的DLBCL患者会进展为难治性或复发性,并且ABC亚型患者预后明显低于GBC亚型患者。因此寻找DLBCL新型的分子标志物不仅能更加完善对DLBCL患者的精确诊断,对患者的临床治疗也起到积极作用。转录因子5(activating transcription factor 5,ATF5)和碱性亮氨酸拉链ATF样转录因子(basic leucine zipper transcription factor ATF-like,BATF)是归属于激活蛋白1(activator protein-1,AP-1)家族亚家族ATF的活化转录因子。ATF5既往的报道主要涉及胶质瘤、非小细胞肺癌、乳腺癌等,在肿瘤细胞的增殖、分化、生长、凋亡、迁移和转化中发挥重要作用。有研究对表现出滤泡性淋巴瘤转化特征的B细胞特异性调控模型进行系统分析,发现ATF5是驱动滤泡性淋巴瘤(follicular lymphoma,FL)向侵袭性弥漫性大B细胞淋巴瘤转化的几个关键转录因子之一;一项关于ATF5在伯基特淋巴瘤(burkitt’s lymphoma,BL)中的研究表明,ATF5作为具有抗血酸抗性的基因之一能促进对抗坏血酸具有抗性的BL细胞(JLPR细胞)发生协调性变化,从而使其存活。BATF主要表达于造血细胞,尤其是B细胞和T细胞,研究发现BATF和其他作用因子可以驱动IRF4的过表达,起到直接调控肿瘤免疫抑制的分子程序作用。有文献报道IRF4辅助因子SPIB和BATF的差异表达能富集MYD88的突变,有助于鉴别ABC亚型DLBCL生物学和临床异质性。T细胞淋巴瘤中,有研究展示了BATF和BATF3在ALK间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)中的表达较高,这两个BATF都与经典的AP-1蛋白结合,并在ALCL失调的AP-1因子中相互作用,BATF基因特异性失活或抑制AP-1都会导致ALCL生长迟缓和/或细胞死亡。关于ATF5和BATF在DLBCL组织中的研究未见报道。本课题基于生物信息数据库预测并结合临床样本的基础实验验证,研究在DLBCL中ATF5蛋白和BATF蛋白的表达情况,分析ATF5和BATF的表达与DLBCL患者临床病理参数及预后的关系。旨在探讨ATF5和BATF在DLBCL中的作用及意义,寻找与其预后相关的新的分子指标。方法1.收集郑州大学第一附属医院病理科2017年1月到2020年6月诊断为DLBCL的120例患者的石蜡样本作为实验组,入组标准:(1)DLBCL初治病人,未经任何放化疗;(2)肿瘤组织充足和符合RNA提取条件。满足条件的石蜡标本共计85例,其中ABC亚型55例,GBC亚型30例,随机选取此时间段内诊断为淋巴结反应性增生的石蜡样本20例作为对照组。2.利用Oncomine、GEPIA数据库预测分析正常组织和肿瘤组织中ATF5与BATF m RNA的表达水平。3.应用免疫组织化学方法检测120例DLBCL石蜡样本与20例对照组石蜡样本中ATF5和BATF蛋白表达情况。4.采用实时荧光定量PCR技术检测85例DLBCL石蜡样本与20例对照组石蜡样本中ATF5和BATF m RNA表达情况。5.统计学分析:用SPSS 22.0统计分析软件,统计分析ATF5和BATF蛋白及m RNA表达情况,并分析ATF5和BATF蛋白与临床病理参数及预后的相关性。结果1.生物信息学数据库预测:Oncomine和GEPIA数据库中ATF5和BATF在DLBCL组织的m RNA表达水平显著高于正常组织(P0.05)。2.免疫组织化学实验验证:ATF5蛋白在120例DLBCL组织中阳性率为50%(60/120),其主要定位于肿瘤细胞胞浆中;在20例对照组中ATF5全部为阴性表达;BATF在120例DLBCL组织中阳性率44.2%(53/120),其主要定位于肿瘤细胞胞浆中,20例对照组中BATF蛋白全部为阴性表达。ATF5和BATF蛋白表达与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。3.q RT-