DPP-Ⅳ抑制肽的制备鉴定及其对糖尿病小鼠肠道微生态影响的研究

作     者：刘丹 

作者单位：内蒙古大学 

学位级别：硕士

导师姓名：吴晓彤

授予年度：2021年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：DPP-Ⅳ抑制肽 响应面分析法 分子对接 小鼠 肠道微生态 

摘      要：本研究采用计算机模拟分析及酶解方法对驴血血红蛋白序列中封存的DPP-Ⅳ抑制肽进行提取,超滤和葡聚糖凝胶柱层析对酶解物进行分离纯化后,质谱和分子对接联合对DPP-Ⅳ抑制肽序列进行鉴定,固相合成2条DPP-Ⅳ抑制肽后进行活性验证。建立Ⅱ型糖尿病小鼠模型,评价源于驴血的DPP-Ⅳ抑制肽对小鼠的降血糖功效,采用16S r RNA测序和GC-MS组学等方法探究其对糖尿病小鼠肠道微生态的影响。本研究主要结果如下:1.蛋白酶K酶解驴血血红蛋白,酶解条件为:底物质量浓度1 g/100 m L,时间是3.15 h,温度65°C,pH为8,加酶量503 U/g,酶解物(2 mg/m L)对DPP-Ⅳ的抑制率为53.44%。2.2条固相合成的DPP-Ⅳ抑制肽分别为VDPENFRLL和YPWTQ,分子对接模拟与DPP-Ⅳ酶的结合能:VDPENFRLL(-8.70)YPWTQ(-9.10),IC值:VDPENFRLL(3.68±0.76 mg/m L)YPWTQ(0.39±0.65 mg/m L),这表明YPWTQ对DPP-Ⅳ酶抑制作用较强。3.活性肽能降低Ⅱ型糖尿病小鼠空腹血糖值,改善糖耐量,与正常组相比,模型组肝脏和胰腺组织均发生了一定程度的病理性结构改变,经过活性肽干预后,二者病理形态损伤得到一定程度修复,且高剂量活性肽组效果最明显。4.活性肽对于糖尿病小鼠肠道微生态具有调节作用,能够通过提高肠道菌群多样性,有益菌丰度,增加乳酸的含量,使糖尿病小鼠肠道微生态得到改善。