中国克氏原螯虾一种新病毒的鉴定及检测方法的建立

作     者：KASSIMU HASHIM AME 

作者单位：南京农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：沈怀舜

授予年度：2019年

学科分类：0906[农学-兽医学] 09[农学] 

主      题：克氏原螯虾 疾病爆发 白斑综合症病 新小RNA病毒 PcPV 

摘      要：克氏原螯虾（Procambarus clarkii）是中国最重要的经济型水生甲壳动物之一,养殖产量高,具有重要经济价值。20世纪20年代从日本引进入中国南京,目前已成为中国分布最广、最著名的淡水经济甲壳动物养殖品种之一。克氏原螯虾抗病能力强、繁殖力强、生长速度快、养殖周期短、适应性强,这些特性使其在新环境的中很容易生存,具有很高的市场需求和经济价值。2018年4月底5月初盱眙县兴隆乡池塘养殖的克氏原螯虾大量死亡,致病原因不明,本研究旨在找出并鉴定克氏原螯虾养殖场暴发的病原。本研究采用聚合酶链反应（PCR）检测和鉴定克氏原螯虾肝脏中的病毒,并采用透射电镜（TEM）技术研究克氏原螯虾鳃组织形态。PCR检测了两个不同的病毒带,即200bp的WSSV带和150bp的未知病毒带。然后利用透射电镜对病毒的形态进行研究。透射电镜证实了病小龙虾鳃中存在大量两种不同的病毒颗粒。病毒颗粒的形态和大小不同。其中一个颗粒呈棒状,有囊膜包被,长约300nm,鉴定为白斑综合征病毒（White spot syndrome virus,WSSV）。WSSV可导致克氏原螯虾患白斑病。另一种病毒外观为球形,无囊膜,直径约30nm,鉴定为小RNA病毒成员。这是一种新的病原。我们将这种新的小 RNA 毒命名为 PcPV（Procambarus clarkiipicorna-like virus）。通过Genbank和分子进化遗传学分析（Mega）软件6.0版,将采用高通量测序技术获得PcPV的基因序列与其他21个小RNA病毒目病毒进行比较分析并构建进化树,分析发现,该病毒序列与未分类的Beihaipicornalike virus病毒105株BHHK79817有75%的遗传同源性,应属小RNA病毒目小RNA病毒科的一个新属。本研究发现,100%的养殖克氏原螯虾PcPV检测为阳性,只有62.5%的养殖克氏原螯虾（15/24）WSSV检测为阳性,37.5%的养殖克氏原螯虾（9/24）WSSV检测为阴性。南泉市健康克氏原螯虾100%PcPV检测为阴性,75%WSSV检测为阳性。我们得出的结论是,该农场的疾病暴发不仅是由于WSSV,PcPV在很大程度上促成了该疾病暴发。新发现的PcPV是克氏原螯虾的新病原。有关于克氏原螯虾PcPV的组织病理学效应和死亡率的研究还需进一步开展。