丁苯酞减轻脓毒症小鼠脑损伤

作     者：岳天雪 

作者单位：锦州医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：胡占升

授予年度：2021年

学科分类：100218[医学-急诊医学] 1002[医学-临床医学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

主      题：脓毒症 脓毒症相关性脑病 丁苯酞 炎症因子 氧化应激 细胞凋亡 

摘      要：目的丁苯酞对脓毒症小鼠是否具有脑保护作用。方法健康成年雄性C57BL/6小鼠70只,随机分3组,假手术组(Sham组)10只;脓毒症组(CLP组),脓毒症+NBP组(NBP组),各30只。CLP或假手术前3天所有小鼠连续每日进行Morris水迷宫(MWM)获得性训练,手术当天于手术前行隐匿平台测试及探查测试;建模;CLP或假手术后6小时,给予NBP组小鼠鼻饲丁苯酞70mg/kg/d,Sham组及CLP组鼻饲等体积植物油;连续7天记录各组小鼠一般情况及死亡数,以计算病死率;各组小鼠于手术前、术后第4天及7天进行神经反射评估;CLP或假手术后24小时取各组存活小鼠5只灌注取材,取海马匀浆后行氧化应激及炎症指标检测;各组存活小鼠于假手术或CLP术后第4天及第7天进行Morris水迷宫(MWM)隐匿平台测试及探查测试。MWM后即刻对各组存活小鼠灌注并取海马组织,左侧行HE染色,右侧行凋亡细胞测定。结果1、行CLP或假手术后24小时Sham组小鼠无死亡,CLP组小鼠死亡5只,NBP组小鼠死亡4只,CLP组与NBP组死亡率为83.3%vs 86.6%(P=1.00),两组死亡率无统计学差异。术后第4天,Sham组小鼠无死亡,CLP组小鼠共死亡15只,NBP组小鼠共死亡10只(注:以上死亡小鼠均不包含24小时用于氧化应激和炎症因子测定的小鼠),CLP组与NBP组小鼠死亡率为(60.0% vs 40.0%,P0.05)。术后第7天,Sham组小鼠无死亡,CLP组小鼠共死亡19只,NBP组小鼠共死亡10只,CLP组与NBP组死亡率76.0% vs 40%(P0.05),存在统计学差异。Kaplan-Meier分析小鼠生存时间提示Sham组与CLP组间存在差异(P0.05),CLP组和NBP组间存在差异(P0.05),Sham组与NBP组间均存在差异(P0.05)。2、相较于Sham组,CLP组SOD及MDA浓度明显升高,有统计学意义(P0.05);TNF-α及IL-6浓度明显升高,有统计学差异(P0.05)。NBP组与CLP组相比,SOD及MDA浓度较低,有统计学差异(P0.05),TNF-α及IL-6浓度均较低,有统计学差异(P0.05);但NBP组与Sham组相比,SOD、MDA、TNF-α及IL-6浓度较高,且均有统计学差异(P0.05)。3、术后24小时,CLP组及NBP组神经反射评估得分较Sham组明显下降,两组与Sham组相较均存在统计学差异(P0.05),虽NBP组得分略高于CLP组,但两组相较无统计学差异(P=0.108)。术后第4天,CLP组及NBP组神经反射评分仍低于Sham组,两组与Sham组得分相较均存在统计学差异(P0.05);NBP组得分高于CLP组,但CLP组与NBP组神经反射评分无统计学差异(P=0.11);术后第7天,CLP组及NBP组评分与Sham组相比仍较低,两组与Sham组得分相比仍存在统计学差异(P0.05);NBP组得分高于CLP组,且两组得分相较存在统计学差异(P0.05)。4、手术当天各组小鼠逃避潜伏时间、进入目标象限比例及进入目标象限次数未见统计学差异;术后第4天,相较于Sham组,CLP组和NBP组逃避潜伏时间明显延长、进入目标象限比例及次数明显下降,且两组与Sham组相比存在统计学差异(P0.05)。NBP组较CLP组潜伏时间延长幅度及进入目前象限比例及次数下降幅度均较小,存在统计学差异(P0.05);术后第7天,相较于Sham组,CLP组逃避潜伏时间仍有延长、进入目标象限比例及次数仍有下降,存在统计学差异(P0.05);但较其术后第4天表现有所好转,存在统计学差异(P0.05)。NBP组避潜伏时间、进入目标象限比例及次数较第4天表现明显好转,且与Sham组相比,不存在统计学差异(P=0.681)。5、光镜下可见Sham组小鼠海马区神经元及胶质细胞大小正常,细胞结构清晰;CLP组小鼠可见神经元细胞核固缩、深染,神经元胞质水肿,间质水肿;NBP组同样可见神经元固缩深染,周围组织水肿,但程度较CLP组较轻。6、Sham组在蓝色背景下可见少量绿色荧光显现,CLP组较Sham组绿色荧光显现明显增多,NBP组绿色荧光显现较Sham组增多,但较CLP组减少。结论丁苯酞能够降低脓毒症小鼠海马区炎症因子的水平及氧化应激反应的程度,可减少神经元的凋亡,改善小鼠的空间记忆障碍,降低小鼠的远期死亡率。