2型单纯疱疹病毒gD亚单位相关疫苗佐剂筛选及免疫学评价

作     者：陈志军 

作者单位：吉林大学 

学位级别：硕士

导师姓名：姜春来

授予年度：2020年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

主      题：2型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus type2,HSV-2) 亚单位疫苗 系统性佐剂 黏膜免疫 细菌样颗粒(Bacterium-like particle,BLP) 

摘      要：2型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus type 2,HSV-2)是一种在全球范围内广泛传播的生殖器疱疹病毒,具有嗜神经性、于感觉神经元内终身潜伏并时常发作的特点,是导致生殖器疱疹产生及复发的主要因素。HSV-2主要通过性传播,其阳性患者感染HIV-1的风险将增加2-3倍。据统计,现今全球感染者超过5亿,每年约有2360万例新增感染患者。目前针对有明显症状的HSV-2感染者,临床上大多选择口服抗病毒药物如阿昔洛韦等进行抗病毒治疗,但这种方法只能轻微缓解临床症状,并不能将病毒彻底清除,无法阻止复发性感染的发生。而一些无症状感染者,则因病毒无声脱落的存在,加大了病毒传播的可能性。基于HSV-2感染的普遍性及现有临床干预手段的局限性,亟需开发一种有效的HSV-2疫苗。关于HSV-2疫苗的研究可追溯到上世纪30年代,通常将其分为预防性和治疗性两种。近百年来,研究人员进行了不懈探究,但目前仍无被批准上市的有效的HSV-2疫苗。随着对于单纯疱疹病毒认识的不断深入及相应疫苗研发失败经验的不断积累,研究人员发现,有效地HSV-2疫苗除需诱导较强的抗体反应外,还需激发CD4及CD8T细胞反应;加强固有免疫及黏膜免疫应答以在病毒入侵的局部快速响应,有效清除外来病原体及被感染细胞。而佐剂除具有增强亚单位抗原免疫反应的能力外还可指导不同类型的免疫反应以抵抗HSV-2感染,因此在疫苗的研发过程中,其选择尤为重要。MF59与多种可溶性抗原具有良好的相容性;葛兰素史克(Glaxo Smith Kline,GSK)公司研发的新型系列人用疫苗佐剂AS(adjuvant System,AS),已在多种市售疫苗或临床实验中证明其有效性;BLP作为多种抗黏膜病原体疫苗的黏膜佐剂或抗原载体,具有显著的免疫刺激作用。因此,在本论文中,选择传统的Al(OH)和MF59佐剂作为对照,将GSK佐剂系统中的AS02,AS03首次应用于HSV-2预防性亚单位疫苗的研究中,以比较四种系统性佐剂辅助抗原的免疫增强效果及免疫反应偏向性;探究新型黏膜佐剂BLP在鼻内免疫的HSV-2重组亚单位疫苗中的免疫刺激作用并侧重从诱发黏膜免疫反应的角度进行分析。以上佐剂均与可介导病毒与宿主细胞膜融合并具有多种T细胞表位和中和抗体表位的包膜糖蛋白D的截短型gD2(1-285aa)(或BLP与重组融合蛋白gD2-PA非特异性结合)混合,分别制备预防性亚单位疫苗和用于黏膜免疫的重组亚单位疫苗,并在小鼠模型中进行评价。全文共分为以下两部分:(1)构建pSecTag2A-gD2质粒并在HEK293T真核表达系统中表达并纯化获得大量gD2及gD2-PA两种目的蛋白;(2)制备上述五种免疫原分别免疫小鼠三次,并对其进行免疫学评价。结论:(1)四种系统性佐剂及新型黏膜佐剂BLP均具有良好的免疫原性,相应疫苗对于致死剂量HSV-2攻毒表现出不同程度的保护性;(2)系统佐剂疫苗免疫组:AS02能诱导产生最高水平的抗体反应,在Th偏向性实验中,Al(OH)、MF59以及AS03均具有Th2型体液免疫偏向性,而AS02则略偏向于诱导相对平衡的Th1/Th2反应,既能诱导体液免疫反应又能介导细胞免疫应答,能够完全清除病毒并对攻毒后小鼠具有100%的保护性;(3)黏膜免疫组:重组融合蛋白gD2-PA-BLP免疫组可仅通过诱导高水平的黏膜特异性IgA抗体反应而对生殖道病毒进行有效清除,是一种有潜力的用于黏膜免疫的重组亚单位疫苗。