藏红花素对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响及相关蛋白的表达

作     者：王军 

作者单位：锦州医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：舒涛

授予年度：2019年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：藏红花素 结肠癌HCT116细胞 凋亡 增殖 

摘      要：目的观察藏红花素对结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡的影响,并探讨藏红花素促进HCT116细胞凋亡相关蛋白的表达,为藏红花素在结肠癌治疗中的应用提供实验室依据。方法采用10%胎牛血清培养基于体外培养结肠癌HCT116细胞,取对数生长期细胞进行试验,加入含藏红花素浓度分别为0,50,100,150,200,250,300,350,400μmol/L的培养基。培养24h后,通过MTT法检测藏红花素对结肠癌HCT116细胞增殖抑制的影响,并计算半数抑制浓度(IC)值。参考IC值将实验分为四组,对照组为不加藏红花素的培养基,低剂量组为二分之一IC值135.6μmol/L,中剂量组为IC值271.2μmol/L,高剂量组为二倍IC值542.4μmol/L。采用克隆形成实验检测四组藏红花素对结肠癌HCT116细胞增殖的影响;通过Hoechst 33342染色,荧光显微镜观察结肠癌HCT116细胞凋亡情况;用流式细胞仪检测结肠癌HCT116细胞的凋亡情况和凋亡率;Western Blot检测结肠癌HCT116细胞中Bcl-2、Bax、Caspase9、Caspase3蛋白表达情况。结果MTT法检测结果显示:不同浓度的藏红花素对结肠癌HCT116细胞的增殖均有抑制作用,随藏红花素浓度的增加,抑制率逐渐增强,经计算,24h时IC为271.2μmol/L。克隆形成实验结果表明:藏红花素可以明显抑制结肠癌HCT116细胞的增殖,其抑制作用呈剂量的依赖性。Hoechst 33342染色结果表明:藏红花素作用24h后,结肠癌HCT116细胞凋亡数量随藏红花素的剂量的增加而增多,凋亡细胞核皱缩、浓聚或碎裂。流式细胞仪检测结果显示:随藏红花素剂量的增加,结肠癌HCT116细胞凋亡率上升,结果有统计学意义(P0.05)。Western Blot检测结果显示:藏红花素干预24h后,随着藏红花素剂量的增加,结肠癌HCT116细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达逐渐下调,促凋亡蛋白Bax和Caspase9、Caspase3的蛋白表达逐渐上调,结果有统计学意义(P0.05)。结论藏红花素能抑制结肠癌HCT116细胞的增殖,并诱导其凋亡,作用机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax、和Caspase9、Caspase3蛋白表达相关。