ANGPTL4通过CDH5促进卵巢癌转移及血管生成

作     者：刘银萍 

作者单位：南京医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：祝亚平

授予年度：2019年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：ANGPTL4 卵巢癌 血管生成 CDH5 

摘      要：研究背景与目的卵巢癌是致死率最高的妇科恶性肿瘤,也是女性癌症死亡的第五大原因。目前卵巢癌的诊疗仍然是一个全球性问题,通常确诊时即为晚期,到目前为止尚无有效的治疗或筛查策略。与其他癌症相似,转移是卵巢癌复发和化疗耐药的主要原因。高级别浆液性卵巢癌具有更复杂的分子病理表型。进一步研究其转移的分子机制,为卵巢癌的复发耐药性和个体化治疗提供新的临床思路。ANGPTL4(血管生成素蛋白样4)属于与血管生成素具有结构相似性的蛋白质超家族。已被证明在多种生理过程中起关键作用,包括作为脂质和葡萄糖代谢的重要调节剂。越来越多的研究揭示了ANGPTL4在多种肿瘤中高表达具有刺激肿瘤血管生成以及促进肿瘤进展功能。2011年癌症基因组图谱和澳大利亚卵巢癌研究协会基于基因表达鉴定了高级别浆液性卵巢癌(High-grade serous ovarian cancer,HGSC)的四种亚型:分化型,免疫反应型,间质性和增殖型,其中间质性预后最差,而ANGPTL4是间质性卵巢癌的标志物之一。但ANGPTL4在卵巢癌发生发展中的作用尚不清楚。在本研究中,我们明确了ANGPTL4在卵巢癌中的临床意义和生物学作用。方法通过高通量测序技术,免疫组化和定量实时聚合酶链反应(RT-PCR)分析ANGPTL4在卵巢癌组织以及卵巢癌细胞株中的表达。使用表达ANGPTL4sh RNA的慢病毒敲除ANGPTL4以评估ANGPTL4在卵巢癌细胞中的生物学功能。EDU实验评估细胞增殖能力,划痕实验以及transwell实验评估细胞迁移及侵袭能力。为了进一步验证ANGPTL4促进肿瘤的转移和血管生成的能力,筛选构建ANGPTL4稳定敲除的SKOV3细胞和对照组细胞通过腹腔注射注入5周龄裸鼠腹腔内,建立卵巢癌腹腔转移的移植瘤模型。种植四周后解剖小鼠,观察腹腔内肿瘤种植个数以及测量瘤体重量,以明确ANGPTL4对卵巢癌细胞生长及腹腔转移能力的调控作用。福尔马林固定瘤体后,利用免疫组化染色检测CD31在瘤体中的表达情况.结果与卵巢癌原发灶相比,ANGPTL4在转移灶中表达量更高,以及相对于正常卵巢组织,ANGPTL4在卵巢癌组织中呈现高表达。此外,ANGPTL4与CD31呈正相关,提示ANGPTL4与人卵巢癌血管生成能力呈正相关.且ANGPTL4过表达的卵巢癌患者预后更差。在SKOV3和HO8910细胞株中敲除ANGPTL4的表达明显抑制了细胞迁移和侵袭能力。与SKOV3 sh ANGPTL4细胞相比,从SKOV3正常对照组细胞收集的条件培养基具有更强的促进HUVEC细胞增殖,迁移,粘附和小管形成能力。同时,在HO8910细胞系中也发现了相同的现象。在体内实验中,与ANGPTL4 KD组相比,对照组的肿瘤种植的个数,肿瘤重量和微血管密度显着增加。在SKOV3和HO8910细胞中敲除ANGPL4后,CDH5,p-AKT、MMP9和MMP2的水平显着下调。结论在本研究中,我们证明ANGPTL4的过表达是卵巢癌预后差的独立危险因素。此外,我们首次证明了ANGPTL4促进卵巢癌的侵袭、转移以及血管生成能力。我们的研究结果表明,ANGPTL4是卵巢癌的发生发展的重要调控因素,同时也是卵巢癌诊断以及评估肿瘤进展的潜在的一个生物标志物。首次揭示了ANGPTL4可能通过调节CDH5/AKT/MMP9/MMP2信号传导途径促进肿瘤转移以及刺激肿瘤血管生成,并且可能是卵巢癌治疗的潜在靶点