抗肿瘤药物顺铂血管毒性作用机制的研究

作     者：李发珍 

作者单位：山西医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：杨彩红

授予年度：2020年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：顺铂 胸主动脉 氧化损伤 PKC NO 

摘      要：目的:1.研究顺铂慢性给药对大鼠胸主动脉的损伤作用及机制;2.研究顺铂对血管平滑肌细胞的损伤作用及机制;3.研究顺铂对大鼠离体胸主动脉环的损伤作用及机制。方法:1.8周龄的SD雄性大鼠,体质量240-260 g,随机分成三组,生理盐水对照组(NS组,ip给予生理盐水,n=8)、顺铂2 mg/kg组(ip给予顺铂2 mg/kg,n=8)、顺铂3 mg/kg组(ip给予顺铂3 mg/kg,n=14),每周1次,连续5周,累积剂量分别为10 mg/kg、15 mg/kg,测各组大鼠尾动脉收缩压(SBP)、舒张压(DBP)以及心率(HR);使用10%水合氯醛(ip给予0.3 mL/100g)麻醉大鼠,腹主动脉采血处死;检测血清中MDA、SOD、NE、GC、ROS、8-OhdG、FSH和TRX含量;同时取大鼠胸主动脉,采用恒温灌流系统检测大鼠胸主动脉对ACh、PE和KCl的血管反应性;HE和Masson染色观察大鼠胸主动脉组织形态学变化;Western blot、免疫组织化学法分析PKC及亚型、TXNIP、iNOS和eNOS蛋白在大鼠胸主动脉组织中表达水平变化。2.培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,分为生理盐水对照组(Control组):给予等体积生理盐水;顺铂DDP 20μM组和顺铂30μM组,给药24 h后,收集细胞,检测细胞内ROS、MDA、SOD及NO含量的变化;Western blot检测PKC及亚型、TXNIP和iNOS蛋白在大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞中表达水平变化。3.离体大鼠胸主动脉血管环分为内皮完整孵育生理盐水组(NS+End组)、去内皮孵育生理盐水组(NS+End组)、顺铂+血管内皮完整组(DDP+End组)和顺铂+血管去内皮组(DDP+End组)。采用恒温灌流系统,观察各组血管环张力的变化;Western blot检测PKC及亚型、TXNIP、iNOS和eNOS蛋白在大鼠胸主动脉血管环组织中表达水平变化。结果:***长期给药降低正常SD大鼠收缩压、舒张压和胸主动脉血管反应性;***长期给药可引起SD大鼠血清中ROS、MDA、8-OhdG、FSH、GC和NE含量升高,而SOD酶活力及TRX含量降低,血清中和胸主动脉组织中NO含量均升高(P0.01)。***长期给药可使大鼠胸主动脉管壁明显增厚,血管内膜不平滑,出现褶皱,血管平滑肌细胞增殖,且各层血管弹力纤维排列紊乱,出现血管重构;Masson染色结果显示,DDP能使大鼠胸主动脉蓝染面积明显增多,血管胶原纤维明显增生,并排列紊乱。***长期给药可使大鼠胸主动脉组织中PKC、PKCα和eNOS蛋白表达水平降低,而PKCβ、PKCβ、iNOS和TXNIP蛋白表达水平升高。***处理大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞后,NO、ROS、MDA含量升高,SOD酶活性降低,且细胞中PKC、PKCα蛋白表达降低,而PKCβ、PKCβ、iNOS和TXNIP蛋白表达增加(P0.01)。***孵育处理大鼠离体胸主动脉血管环后,血管环对KCl和PE的血管收缩反应性降低,且大鼠离体胸主动脉血管环中PKC、PKCα和eNOS蛋白表达降低,而PKCβ、PKCβ、iNOS和TXNIP蛋白表达增加(P0.01)。结论:***长期给药能降低胸主动脉血管反应性,且导致血管平滑肌细胞增殖,血管纤维化,血管中膜层增厚,其机制可能与DDP抑制PKC及PKCα表达,增加PKCβ、PKCβ、iNOS和TXNIP表达,导致NO过量产生,引起氧化损伤有关。***可抑制PKC及PKCα表达,增加PKCβ、PKCβ、iNOS和TXNIP表达,引起NO和ROS过量产生,导致氧化应激损伤,降低血管平滑肌细胞生存率。***孵育大鼠离体胸主动脉环,可降低血管环对KCl、PE收缩程度,其机制可能与降低大鼠离体胸主动脉血管环中PKC、PKCα和eNOS蛋白表达,增加PKCβ、PKCβ、iNOS和TXNIP蛋白表达有关。