过表达P75NTR负向调控BMSCs增殖及成骨分化的实验研究

作     者：朱伦井 

作者单位：桂林医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：贝朝涌

授予年度：2020年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

主      题：P75NTR 骨髓间充质干细胞 过表达 成骨分化 增殖 

摘      要：目的:通过研究P75NTR过表达对体外培养的兔骨髓间充质干细胞的影响,阐明过表达P75NTR可以负向调控BMSCs的增殖及成骨分化,为提高骨组织工程修复骨缺损不愈合的疗效提供相关的干预靶点。方法:选取幼年新西兰大白兔双侧股骨,用全骨髓分离贴壁法提取兔骨髓间充质干细胞体外培养;构建表达EGFP的P75NTR过表达慢病毒载体并感染体外培养的原代兔骨髓间充质干细胞;感染后培养至7 d用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达丰度,并用Western blot检测P75NTR蛋白的过表达情况;用CCK8检测感染后细胞的生长活性情况;同时经成骨诱导分化培养,检测碱性磷酸酶活力及矿化结节形成情况来评估感染后细胞的成骨分化能力。结果:体外分离培养的兔骨髓间充质干细胞符合实验设计需要;P75NTR过表达慢病毒构建成功后感染兔骨髓间充质干细胞能表达出绿色荧光蛋白（感染效率约90%）,且P75NTR蛋白表达量明显增多,与阴性病毒对照组及正常细胞组比较,差异有显著性意义（P0.05）,过表达P75NTR的细胞模型构建成功;过表达P75NTR的兔骨髓间充质干细胞的生长明显受抑制（P0.05）;过表达P75NTR的兔骨髓间充质干细胞在体外经诱导成骨分化培养后,其碱性磷酸酶活力明显降低,矿化结节形成明显减少（差异比较有统计学意义,P0.05）。结论:过表达P75NTR可以负向调控BMSCs的增殖及成骨分化。