在Aβ诱导AD小鼠模型中BDNF通过上调TRPC3表达发挥神经保护机制研究

作     者：李爽 

作者单位：沈阳医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：张丽艳

授予年度：2020年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100203[医学-老年医学] 10[医学] 

主      题：经典瞬时受体电位通道3 阿尔茨海默病 β-淀粉样蛋白 脑源性神经营养因子 

摘      要：目的通过给予BDNF特异性受体TrkB激动剂(7,8-DHF)、TRPC3激动剂(O AG)及抑制剂(Pyr3)来研究BDNF和TRPC3对AD小鼠的神经保护作用以及BDNF与TRPC3之间的相互关系。方法1.雄性ICR小鼠,5周龄,20-24g,将其随机分为对照组、AD组、AD+OAG组、AD+7,8-DHF组和AD+7,8-DHF+Pyr3组。2.适应性喂养5天后,第六天分别给予对照组和实验组小鼠生理盐水和Aβ1-42,进行侧脑室注射,建立动物模型。3.实验组分别给予7,8-DHF、OAG、Pyr3进行腹腔注射,每天给药一次,连续给药21天后取小鼠的海马组织及全脑。4.应用DigBehv Morris水迷宫行为学检测系统(定位航行实验和空间探索实验),检测小鼠的学习记忆能力。*** blot和免疫组化检测小鼠海马区的TRPC3和突触相关蛋白syn apsin-Ⅰ、CaMKⅡ-α的表达和定位情况。***测定各组小鼠海马中Aβ浓度;刚果红染色检测小鼠海马区Aβ沉积情况。结果***水迷宫行为学检测结果显示,连续5天每组小鼠的游泳速度稳定。相较于对照组,AD组第五天小鼠逃避潜伏期延长[(11.19±2.05)s和(25.80±4.11)s P0.001];相较于AD组,AD+7,8-DHF组和AD+OAG组逃避潜伏期缩短[(25.80±4.11)s和(15.08±2.47)s及(15.11±1.42)P0.01];相较于AD+7,8-DHF组,AD+7,8-DHF+Pyr3组逃避潜伏期延长[(15.08±2.47)s和(33.70±8.37)P0.001]。第六天目标象限停留时间AD组较对照组减少[(12.47±1.27)s和(26.50±2.7)s P0.001],AD组较AD+7,8-DHF组和AD+OAG组减少[(12.47±1.27)s和(20.92±1.51)s及(21.51±1.35)s P0.01],AD+7,8-DHF+Pyr3组较AD+7,8-DHF组减少[(11.09±0.62)s和(20.92±1.51)s P0.01]。与对照组相比,AD组第六天穿越平台次数减少[(1.33±1.03)和(3.67±0.82)P0.05];与AD组相比,AD+7,8-DHF组和AD+OAG组穿越平台次数增加[(1.33±1.03)和(3.33±1.21)及(3.17±0.98)P0.05];与AD+7,8-DHF组相比,AD+7,8-DHF+Pyr3组穿越平台次数减少[(3.33±1.21)和(1.17±1.16)P0.05]。各组的轨迹图趋势同目标象限停留时间变化趋势。*** blotting结果显示,在小鼠海马组织中,AD组与对照组相比,TRPC3以及突触相关蛋白synapsin-Ⅰ和CaMKⅡ-α蛋白相对含量均降低(P0.01,P0.001,P0.001);与AD组相比,AD+7,8-DHF组和AD+OAG组中TRPC3、synapsin-Ⅰ和CaMKⅡ-α蛋白相对含量均增加(P0.01,P0.001,P0.01);与AD+7,8-DHF组相比,AD+7,8-DHF+Pyr3组TRPC3、synapsin-Ⅰ和CaMKⅡ-α蛋白相对含量均降低(P0.05,P0.01,P0.05)。3.免疫组化结果显示,与对照组相比,AD组小鼠海马CA1区synapsin-Ⅰ和CaMKⅡ-α蛋白表达显著降低(P0.05,P0.01),TRPC3蛋白表达明显降低(P0.05);与AD组相比,AD+7,8-DHF组海马CA1区synapsin-Ⅰ和CaMKⅡ-α蛋白表达显著增加(P0.05,P0.01),TRPC3蛋白表达明显增加(P0.05),AD+OAG组小鼠海马CA1区synapsin-Ⅰ和CaMKⅡ-α蛋白表达显著增加(P0.05,P0.01),TRPC3蛋白表达明显增加(P0.01);与AD+7,8-DHF组相比,AD+7,8-DHF+Pyr3组海马CA1区synapsin-Ⅰ蛋白表达显著降低(P0.001)CaMKⅡ-α蛋白表达无明显差异,TRPC3蛋白表达显著降低(P0.01)。***结果显示,在小鼠海马组织中,相较于对照组,AD组小鼠Aβ1-42浓度增高(P0.001);相较于AD组,AD+7,8-DHF组及AD+OAG组Aβ1-42浓度降低(P0.01,P0.01);相较于AD+7,8-DHF组,AD+7,8-DHF+Pyr3组Aβ1-42浓度增高(P0.001)。5.刚果红染色结果显示,AD组和AD+7,8-DHF+Pyr3组小鼠海马CA1区胞核周边可见红色均一无结构的淀粉样物质沉积,对照组淀粉样物质沉积较