基于BDNF/TrkB/CREB信号通路探讨芪仙通络方对MCAO大鼠突触重塑的影响及作用机制

作     者：寿雅琨 

作者单位：湖南中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘芳

授予年度：2020年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：突触重塑 脑梗死 芪仙通络方 BDNF/TrkB/CREB信号通路 

摘      要：目的:本实验拟在前期研究明确芪仙通络方可恢复大脑中动脉闭塞MCAO大鼠受损神经功能的基础上,进一步探讨基于BDNF/Trk B/CREB信号通路上该方对MCAO大鼠突触重塑的影响及作用机制,为芪仙通络方临床进一步推广应用提供实验基础。方法:以MCAO大鼠模型为研究对象,给以基于国医大师刘祖贻“脑髓阳生阴长理论的中药复方芪仙通络方及信号通路阻断剂K252a进行干预,胞磷胆碱阳性药作对照,采用Berdson评分、BWT神经功能评分及透射电镜、免疫组化、Western Blot等现代生物学方法,检测脑梗死后大鼠神经功能、脑梗死周边区域突触重塑情况,BDNF、Trk B、CREB、p-CREB蛋白表达水平;研究芪仙通络方促进脑梗死后神经功能恢复的突触超微结构基础和该方对突触重塑影响的分子机制。结果:1.一般状态:中药组及胞磷胆碱组大鼠术后1 4天精神状态、反应活动、毛色、饮食量均较除假手术组外各组明显好转。2.行为学评分:（1）Ber d so n评分:随着术后时间的延长,模型组评分逐渐升高（P0.01）;中药组在术后3天开始评分逐渐降低（P0.05）;胞磷胆碱组评分在术后7天开始逐渐降低（P0.01）;（2）BWT评分:随着术后时间的延长,中药组在术后3天开始评分逐渐升高（P0.01）,中药组分别与溶剂组、模型组、阻断剂+中药组、阻断剂组比较评分增高（P0.0 5）。3.突触超微结构相关指标:（1）P S D厚度:中药组P S D厚度分别较假手术组、模型组、阻断剂组、阻断剂+中药组、溶剂组显著增加（P0.05）;（2）突触间隙宽度:中药组与模型组、胞磷胆碱组相比突触间隙宽度显著减小（P0.05）;（3）突触活性区长度:中药组较其他各组突触活性区长度显著增加（P0.05）;胞磷胆碱组较阻断剂+中药组突触活性区长度显著增加（P0.05）。4.免疫组化:（1）PS D-9 5:中药组的P S D-9 5平均光密度值较其余各组显著增加（P0.05）;胞磷胆碱组的PSD-95平均光密度值分别较模型组、阻断剂组、阻断剂+中药组、溶剂组显著增加（P0.05）;（2）SYN:中药组的SYN平均光密度值较其余各组显著增加（P0.05）;胞磷胆碱组的SYN平均光密度值分别较模型组、阻断剂组、阻断剂+中药组、溶剂组显著增加（P0.05）。*** er n b lo t:（1）BD N F蛋白表达水平:中药组分别较阻断剂组、阻断剂+中药组、胞磷胆碱组显著上调BDNF蛋白表达水平（P0.05）;（2）中药组分别较阻断剂+中药组、胞磷胆碱组、溶剂组显著上调p-CREB蛋白表达水平（P0.05）。结论:1.芪仙通络方可促进MCAO模型大鼠神经功能恢复,且作用效果优于胞磷胆碱;2.芪仙通络方可通过突触重塑促进神经功能恢复;*** N F/Tr k B/CRE B信号通路是芪仙通络方促进神经元细胞突触重塑的关键机制之一。