乌骨藤提取物抑制大鼠肝纤维化的分子机制研究

作     者：张国庆 

作者单位：安徽医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：章礼久

授予年度：2019年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：乌骨藤提取物 肝纤维化 TGF-β/Smads PI3K/Akt MAPK信号转导通路 

摘      要：目的研究从中药乌骨藤中提取总皂苷(SMT)对四氯化碳(CCl)诱导的肝纤维化模型大鼠的影响及作用机制。方法60只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、SMT低剂量组(10 ***)和SMT高剂量组(40 ***),每组15只。通过皮下注射CCl制备大鼠肝纤维化模型,按0.3 mL·100 g,每周2次,共12周。造模4周后给药组开始灌胃给予相应剂量的药物(SMT),同时正常对照组和模型组给予等量生理盐水。12周后处死大鼠,测定血清中ALT、AST、SOD、MDA、GSH-px、HA、LN和CⅣ含量;HE染色观察实验大鼠肝组织病理,Masson染色观察肝脏胶原沉积变化;Western blot法检测肝组织α-SMA、p-smad2、p-smad3、p-p38MAPK和p-PI3K的蛋白表达水平。结果病理结果显示,正常组大鼠肝细胞排列整齐、呈放射状排布,可见完整的肝小叶结构和中央静脉,未见明显的炎性和坏死特征以及纤维组织增生;模型组大鼠肝脏可见明显的细胞变性、坏死和脂肪变性特征,Masson染色可见明显的胶原沉积和肝细胞疏松;SMT各剂量组的大鼠肝组织病理较模型组明显好转,肝细胞坏死及炎细胞浸润程度明显减轻,汇管区胶原沉积减少,尤其SMT高剂量组。血清学指标检测结果显示,与正常组比较,模型组大鼠的血清ALT、AST、MDA、HA、LN和CⅣ水平均明显升高(P0.01),而SOD、GSH-Px水平显著降低(P0.01);与模型组比较,SMT低剂量组和SMT高剂量组的ALT、AST、MDA、HA、LN和CⅣ水平均显著降低,SOD、GSH-Px水平明显升高,且存在量效关系,差异具有统计学意义(P0.01)。Western blot实验结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肝组织的α-SMA、p-Smad2、p-Smad3、p-p38MAPK、p-PI3K的蛋白表达水平均显著升高(P0.01);与模型组比较,SMT低剂量组和SMT高剂量组的α-SMA、p-Smad2、p-Smad3、p-p38MAPK、p-PI3K蛋白表达水平均显著降低,差异具有统计学意义(P0.01)。结论SMT对CCl诱导的大鼠肝纤维化有明显的抑制作用,可减轻模型大鼠肝脏病理损伤程度、降低实验大鼠的血清ALT、AST、HA、LN和CⅣ水平和肝组织α-SMA蛋白的表达水平,机制可能与其调节肝脏TGF-β/smads、PI3K/Akt和MAPK信号转导通路有关。本研究可为肝纤维化的预防和治疗提供新思路和一定的理论、实验基础。