大颗粒T淋巴细胞白血病SLAMF7表达分析及机制研究

作     者：康萍 

作者单位：江苏大学 

学位级别：硕士

导师姓名：毛朝明

授予年度：2020年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：大颗粒淋巴细胞白血病 SLAMF7 CD8+T淋巴细胞 颗粒酶B NF-κB 

摘      要：目的:研究大颗粒淋巴细胞白血病(Large granular lymphocytic leukemia,LGLL)初诊患者外周血肿瘤性大颗粒T淋巴细胞(Large granular T lymphocytes,T-LGL)中SLAMF7的表达及分子机制,通过阐明SLAMF7与T-LGL的关系,为LGLL的诊疗提供潜在的靶标。方法:1.采用流式细胞技术测定LGLL患者外周血中T-LGL及健康对照淋巴细胞中SLAMF7的表达水平。2.流式细胞术检测LGLL患者LGL中穿孔素和颗粒酶B水平。采用Pearson相关,对SLAMF7和穿孔素、颗粒酶B进行相关性分析。3.瑞士-吉姆萨染色法染色观察外周血中LGL的形态特点。4.用Ficoll密度梯度离心法提取健康人外周血单个核细胞(Peripheral BloodMononuclear Cells,PBMC),用不同浓度(0.25、0.5、1、2μg/mL)的植物血凝素(PHA)处理PBMC不同时间(6、24、48、72 h)后,流式细胞技术检测CD8T细胞中SLAMF7表达水平的变化。5.用PHA(0.5μg/mL)持续刺激人PBMC建立慢性活化淋巴细胞模型(ChronicActivated Lymphocytes Model,CALM),流式细胞技术分析CD4T细胞和CD8T细胞中SLAMF7表达特点。6.用免疫印迹的方法检测CALM模型中CD8T细胞在24、48 h时p65、p-p65、STAT3、p-STAT3、mTOR、p-mTOR蛋白水平变化。***-16(2、4μM)、Rapamycin(10、20 nM)处理CALM模型24、48 h后,流式细胞技术检测CD8T细胞中SLAMF7表达水平。8.用IKK-16(4μM)作用CALM模型48 h后,流式细胞技术检测CD8T细胞中SLAMF7和颗粒酶B的表达水平。结果:1.与健康对照组相比,SLAMF7在大颗粒T淋巴细胞白血病患者的T-LGL表达明显升高;同样的,在正常NK细胞及大颗粒NK淋巴细胞白血病患者的NK-LGL均高水平表达。***中,SLAMF7与嗜天青颗粒的主要成分颗粒酶B和穿孔素的表达均呈正相关关系。***经瑞士-吉姆萨染色后的形态特点:相较于正常发育的成熟淋巴细胞,LGL体积较大,胞浆丰富,细胞核大、不规则以及其中可见多少不等的核仁,特征性改变是轻微嗜碱性的胞浆中出现大小不等的嗜天青大颗粒。4.与未处理组相比,PHA(0.5、1、2μg/mL)处理PBMC不同时间(24、48、72 h),CD8T细胞中SLAMF7表达水平均显著上调。***模型中CD4T细胞中SLAMF7从24 h开始升高,48 h达峰值,72h后升高幅度较前降低;从24 h开始,CD8T细胞中SLAMF7逐渐升高,48 h达峰值,72 h升高幅度不变。***模型培养24、48 h后,NF-κB/STAT3/mTOR信号通路相关蛋白(p65、STAT3、mTOR)的磷酸化水平均升高,并且具有时间依赖性。***-16(2、4μM)处理CALM模型24、48 h后,均可以显著降低CD8T细胞中SLAMF7表达水平,并且浓度为4μM及处理48 h时效果最明显。***-16(4μM)处理CALM模型48 h后,显著逆转CD8T细胞中SLAMF7和颗粒酶B表达上调。结论:大颗粒淋巴细胞白血病患者外周血T-LGL中SLAMF7呈高水平表达,与NF-κB信号通路过度激活有关;SLAMF7表达水平与穿孔素、颗粒酶B呈正相关。上述结果提示SLAMF7可作为T-LGL的特征性标志,可作为LGLL临床诊疗的潜在靶标。