circ-BMI1在食管癌中的表达及生物学功能研究

作     者：朱昕 

作者单位：江苏大学 

学位级别：硕士

导师姓名：邓兆群

授予年度：2020年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：食管癌 BMI1环状RNA miR-153-5p miR-4666a-3p 早期B细胞因子3 

摘      要：目的:食管癌（Esophageal Cancer,EC）是一种常见的癌症类型,发病率高,死亡率高。尽管外科手术、化学疗法、放射疗法和生物靶向疗法已被用于治疗食管癌,但患者总体预后仍然很差。随着临床分期和病理分级的提高,食管癌的预后明显恶化。目前,迫切需要找到合适的分子生物标志物和治疗靶点进行早期诊断,并提高食管癌患者的生存率。本研究拟检测食管癌患者中BMI1环状RNA（circ-BMI1）的表达水平,并探索食管癌发生发展过程中circRNA发挥的生物学功能及其分子机制。方法:1.应用实时定量PCR（RQ-PCR）检测10例初发食管癌患者癌组织和癌旁组织标本中circ-BMI1的转录本水平;检测49例食管癌患者和28例健康对照的血清中的circ-BMI1的转录本水平,分析其临床相关性。2.circ-BMI1转染Eca109细胞株,经流式细胞仪分选,构建稳定转染的NC-Eca109细胞和circBMI1-Eca109细胞,并利用RQ-PCR检测转染效率。3.通过CCK8法、流式细胞技术进行细胞增殖、迁移、凋亡实验、化疗药物敏感性等实验,进一步分析circ-BMI1在Eca109细胞中生物学功能。4.通过裸鼠致瘤实验分析circ-BMI1对体外裸鼠成瘤的影响,并检测肿瘤组织中circBMI1、EBF3等基因的表达水平。5.生物信息学网站预测circ-BMI1的靶向miRNA,并进一步寻找下游靶基因。6.RQ-PCR检测NC-Eca109细胞和circBMI1-Eca109细胞中miR-153-5p、miR-4666a-3p转录本水平。结果:1.circ-BMI1表达水平在食管癌中较对照显著下调（P0.01）。接受者操作特征曲线（Receiver operating characteristic curve,ROC）显示,血清circ-BMI1的表达水平可区分食管癌患者与健康对照。结合临床资料分析,circ-BMI1低表达组的低分化患者与高表达组相比,低分化率显著升高（P=0.016）,淋巴结转移率明显升高（P=0.010）。2.circ-BMI1稳定转染Eca109细胞,RQ-PCR检测,circ-BMI1在circBMI1-Eca109细胞的表达量明显高于NC-Eca109细胞（P0.001）。3.细胞功能实验结果显示,circBMI1-Eca109细胞生长速度显著慢于NC-Eca109细胞（P0.01）;circBMI1-Eca109细胞在营养不良的环境下的生长明显慢于对照组（P0.01）;circBMI1-Eca109细胞的迁移能力、集落形成能力均明显弱于对照组细胞（P0.01;P0.01）;circBMI1-Eca109细胞对于顺铂、5-氟尿嘧啶的敏感性显著高于对照组（P0.05）。4.circBMI1-Eca109组裸鼠生长的肿瘤体积较对照组明显减小（P0.05）,同时circBMI1-Eca109组中circ-BMI1表达量明显高于对照组（P0.01）。5.生物信息学网站预测circ-BMI1的靶向miRNA为miR-153-5p及miR-4666a-3p,进一步寻找miRNA下游靶基因,查阅相关文献,找出EBF3为与食管癌相关的基因。6.过表达circ-BMI1的Eca109细胞中miR-153-5p、miR-4666a-3p表达较对照下调（P0.01;P0.05）。结论:circ-BMI1在食管癌中表达下调,circ-BMI1的转录本水平可能作为区分食管癌患者及健康对照的潜在标志物,具有辅助诊断标记意义。circ-BMI1可能通过海绵吸附miR-153-5p、miR-4666a-3p而促进EBF3的表达来调控食管癌细胞功能及肿瘤的发展。