SIRT1/miR-182-5p调控的细胞自噬对胃癌细胞生物学行为的影响及其机制研究

作     者：相绿竹 

作者单位：青岛大学 

学位级别：硕士

导师姓名：牟晓峰

授予年度：2020年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：SIRT1 miR-182-5p 自噬 增殖 转移 

摘      要：目的胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁人类的健康。已有研究表明SIRT1/miR-182-5p参与肿瘤发生发展过程,但SIRT1/mi R-182-5p在胃癌中的作用以及参与胃癌发病的具体机制尚未被完全阐明。本研究以细胞自噬为切入点,旨在研究胃癌中SIRT1/mi R-182-5p调控的细胞自噬对胃癌细胞增殖和转移的影响及其分子机制,以期为胃癌的发病机制和临床治疗寻找潜在的新型靶点和理论依据。方法免疫组织化学染色检测来自胃癌组织芯片的90对胃癌与癌旁组织中SIRT1的表达,蛋白免疫印迹实验检测临床收集的16对胃癌与癌旁组织中SIRT1的表达。荧光原位杂交技术检测来自胃癌组织芯片的87对胃癌与癌旁组织中miR-182-5p的表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测临床收集的16对胃癌与癌旁组织、人胃黏膜上皮细胞GES-1与胃癌细胞BGC-823、AGS、SGC-7901中miR-182-5p的表达。双荧光素酶报告基因实验和染色质免疫共沉淀技术确定SIRT1与miR-182-5p之间的结合关系。荧光标记检测技术和蛋白免疫印迹实验检测细胞自噬状态。CCK-8实验、划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力,凋亡实验检测凋亡细胞和死亡细胞的百分比。裸鼠皮下荷瘤实验检测mi R-182-5p对瘤体体积和瘤体重量的影响。结果与癌旁组织和GES-1细胞相比,胃癌组织和胃癌细胞BGC-823、AGS、SGC-7901中SIRT1与miR-182-5p的表达均显著增加(P0.05),且SIRT1可以结合在miR-182-5p的启动子区域调控miR-182-5p的表达。过量表达miR-182-5p时,胃癌细胞增殖和转移能力增强(F=31.72,F=60.14,F=84.41,P0.05)、凋亡细胞和死亡细胞的百分比降低(F=52.72,P0.05),抑制miR-182-5p的表达时,细胞增殖和转移能力减弱、凋亡细胞和死亡细胞的百分比增加(P0.05)。过量表达miR-182-5p时细胞自噬水平增强(F=43.94,P0.05),自噬相关蛋白LC3B-II/I比值和Beclin1表达增加(FⅡ/Ⅰ=60.48,F=37.56,P0.05),抑制miR-182-5p的表达时,细胞自噬水平显著降低(P0.05)。miR-182-5p可以结合在CEBPA和PPARG基因的非编码区并调控其表达,进一步的机制研究发现,SIRT1/miR-182-5p可能通过下游靶基因CEBPA和PPARG调控ATG7而增强细胞自噬水平,进而促进胃癌细胞的增殖和转移。裸鼠皮下荷瘤实验进一步证实下调mi R-182-5p的表达可以显著减小瘤体的体积和减轻瘤体的重量(F=77.33,F=103.10,P0.05)。结论胃癌中SIRT1与miR-182-5p的表达均显著升高,且SIRT1可以结合在miR-182-5p的启动子区域,调控miR-182-5p的表达。SIRT1/miR-182-5p促进胃癌细胞的增殖和转移,很可能是通过下游靶基因CEBPA和PPARG调控ATG7而增强细胞自噬水平实现的。