探讨MRDI与食管鳞癌侵袭转移的关系及其在临床中的意义

作     者：秦宁 

作者单位：郑州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘宗文

授予年度：2020年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：MRDI 食管鳞癌 侵袭 迁移 RhoA 

摘      要：背景在我国消化道肿瘤中食管癌比较多见,我国的食管癌发病率、死亡率在世界上排首位。Ras同源基因家族成员A（Ras homolog gene family,member A,RhoA）是 Ras 超家族中具有 GTP 酶（guanosine triphosphate phosphohydrolase,GTPase）活性的一种小G蛋白分子,其在肿瘤组织中的表达与肿瘤的恶性程度正相关。有研究证实,RhoA的酶活性通过信号通路参与细胞骨架重排,进而诱导细胞癌变及肿瘤细胞增殖、侵袭、转移、屏障功能和凋亡等多种生命活动。而 MRDI（Mediator of RhoA-dependent invasion,MRDI）基因作为一种“依赖 RhoA的侵袭媒介的未被鉴定基因,其应答RhoA的感应并促进依赖RhoA细胞的侵袭及细胞运动。有文献报道,MRDI与多种肿瘤的侵袭性相关,但其在食管癌复发、转移中的作用,以往在国内外均无报道。食管癌及癌旁组织中MRDI的表达情况及其与临床病理的联系尚不明确。目的本研究拟初步探讨:***在食管鳞癌组织及癌旁组织中的表达状况;***蛋白表达与临床病理参数（性别、年龄、分化程度、淋巴结转移情况、肿瘤浸润深度、临床TNM分期、脉管癌栓、神经侵犯、烟酒嗜好等）之间的关系,及其对患者预后及生存时间的影响;***基因表达对食管鳞癌细胞侵袭、迁移、增殖能力的影响;***基因表达在临床中的意义。材料与方法1.本研究以郑州大学第二附属医院2014.04.20-2015.10.22收治的76例经手术治疗的食管癌病人为研究对象。入组条件:①患者信息完善（包括个人信息及临床病理资料信息）;②所有患者术前没接受过放、化疗以及其他特殊诊疗;③手术方式:食管癌根治性切除,于术后立即取材,将癌组织、癌旁组织制成组织病理蜡块保存。其组织类型均为食管鳞癌,病理诊断由病理科两位以上专家复诊为鳞癌。不满足以上条件的予以排除。所有患者均已签署由医院伦理委员会批准的患者知情同意书,符合医学伦理学规定。该76例食管癌患者年龄均在45-90岁范围内,余统计信息如下表（表1）:表1 76例食管鳞癌患者临床信息2.实验方法:①免疫组化SP法用于检测食管鳞癌及对应癌旁组织中的MRDI蛋白表达;②随访对应患者的预后及生存信息,确定MRDI蛋白表达与患者生存时间及不同临床病理参数之间的关系;③实验分为blank、siNCtrl、MRDI-siRNA#1、MRDI-siRNA#2、MRDI-siRNA#3 五组,应用 qRT-PCR 和Westerrn Blot法筛选转染效率最佳的siRNA;④利用已筛选出的siRNA调低食管鳞癌细胞EC109及EC9706中MRDI表达,Transwell法、划痕实验、CCK8法分别检测下调MRDI前后食管鳞癌细胞EC109和EC9706侵袭、迁移和增殖能力的变化。结果1.与癌旁组织相较,MRDI蛋白在食管鳞癌组织中呈高表达（P0.0001）。2.免疫组化结果显示MRDI蛋白在食管鳞癌组织中的亚细胞定位主要在细胞质,细胞核有少量表达,而在绝大多数表达阳性的食管鳞癌癌旁组织中MRDI蛋白的亚细胞定位主要在细胞核。3.在部分癌旁组织中MRDI蛋白的分布具有方向性,主要向细胞质膜的前缘富集,且这种积聚现象呈现逐步进展的趋势。4.生存分析显示:MRDI蛋白高表达的食管鳞癌患者总生存率下降（P=0.002）。5.食管鳞癌患者组织中的MRDI蛋白表达与低分化（P=0.010）、肿瘤浸润程度深（病理T分期）（P=0.015）和血管侵犯与否（脉管癌栓）（P=0.047）有关。6.食管鳞癌细胞EC109和EC9706中MRDI表达被调低后,细胞的侵袭、迁移和增殖能力均减弱。结论***蛋白表达量与食管鳞癌患者的生存及预后相关,MRDI蛋白高表达的食管鳞癌患者3年总生存率降低。2.食管鳞癌中MRDI蛋白表达变化早于细胞形态学改变,而MRDI蛋白的质膜前缘积聚现象可能是肿瘤逐步进展的“先驱信号。3.在食管鳞癌中,MRDI充当癌基因的作用,影响细胞的侵袭、迁移和增殖过程。