延胡索治疗心肌缺血物质基础研究

作     者：黄启和 

作者单位：天津医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：侯文彬

授予年度：2019年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：延胡索 指纹图谱 季胺碱 心肌缺血 分子对接 

摘      要：目的:研究延胡索治疗心肌缺血的物质基础及其可能的作用机制。方法:运用中药指纹图谱技术对不同批次的延胡索药材进行了指纹图谱研究,选用C色谱柱,柱温为30℃,流动相为乙腈-0.2%醋酸水溶液,梯度洗脱,流速为1.0ml/min,检测波长为280nm;挑选雄性大鼠分为7组,每组8只,分为假手术组、模型组、单硝酸异山梨酯组、叔胺碱低浓度组10mg/kg、叔胺碱高浓度40mg/kg,季胺碱低浓度组10mg/kg、季胺碱高浓度组40mg/kg,连续预防给药7天,第7天给药半小时后,通过对大鼠进行心脏冠状动脉结扎法造成大鼠急性心肌缺血,然后检测各组大鼠心电图,取大鼠心脏组织切片,TTC染色,观察各组缺血情况。腹主动脉取血离心后检测血清生化指标,研究血清中内皮素(ET)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(eNOS)、血栓素(TXB2)、前列环素(PGI2)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)等与心肌损伤相关的酶类变化,观察大鼠心肌损伤情况,研究延胡索中两种类型生物碱对大鼠急性心肌缺血的治疗作用;结合TCMSP平台筛选到符合条件的目标小分子化合物,运用Maesrto11.1分子对接软件筛选延胡索中与相应靶点蛋白对接较好的小分子化合物,再运用Cytoscape3.6.1构建多成分-靶点网络药理图,通过拓扑学分析,阐释其网络特征。结果:确定了14个共有峰,建立了延胡索药材指纹图谱,通过分析得到10批延胡索药材指纹图谱的相似度均大于0.9,测定了9种生物碱的含量;与模型组相比,季胺碱高剂量处理组心肌缺血后心电图结果显示ST段回落明显;季胺碱不同剂量处理组均能降低心肌细胞梗死率;季胺碱不同剂量处理组能降低肌酸激酶同工酶CK-MB、乳酸脱氢酶LDH、天门冬氨酸氨基转移酶AST水平;季胺碱高剂量处理组能提高NO含量、eNOS活力值,季胺碱不同剂量处理组均能降低内皮素ET含量;季胺碱不同剂量处理组均能够提高前列环素PGI2水平,高剂量季胺碱组降低血栓素TXB2水平;在16种心肌缺血靶点对接结果中,8种季胺碱化合物,1种黄酮类,2种叔胺碱类显示出了较好的对接结果。季胺碱类化合物和黄酮类槲皮素对接结果普遍优于叔胺碱类,对接结果中季胺碱打分平均值高于叔胺碱的靶点蛋白有10种。网络药理图结果分析得知多化合物-靶点的网络异质性为0.57,平均相邻节点数3.59,特征网络长度3.02,网络中心度0.21。结论:延胡索季胺碱类化合物黄连碱、巴马汀、去氢紫堇鳞茎碱、药根碱、非洲防己碱、小檗碱,黄酮类槲皮素可能是治疗心肌缺血的物质基础,延胡索治疗心肌缺血是多成分与多靶点相互作用的结果。季胺碱以及黄酮类槲皮素可能是通过调节心肌细胞能量代谢、减少心肌细胞凋亡从而抑制心肌细胞―损伤-酶释放-再损伤‖的恶性循环、清除心肌细胞氧自由基、减轻心肌细胞炎症反应、改变血液流变学性质减轻血液黏度方面发挥作用,以此达到抗心肌缺血作用。